Assay Genie高灵敏度脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒的应用

脂肪酸氧化

脂肪酸每碳提供的ATP比葡萄糖等碳水化合物多。 在具有高能量需求的组织中，例如心脏组织，高达 50 - 70%的能量来自脂肪酸β-氧化，可转化脂肪 酸制乙酰辅酶A，同时产生FADH2和NADH 线粒体。

这种严格的有氧氧化途径由四个不同的步骤组成： 酰基辅酶A脱氢酶脱氢，烯酰辅酶A水合 水合酶，通过 3-羟基酰辅酶 A 脱氢酶和硫解酶脱氢 β-酮硫醇酶裂解。

研究脂肪酸氧化的重要性

β-氧化系统在人体中的重要性体现在 存在一组被归类为脂肪酸氧化的遗传疾病 疾病（FAOD），这是一组异质性脂肪酸缺陷 转运和氧化，并遗传为常染色体隐性遗传病， 具有广泛的临床表现。

此外，有证据表明，粮农组织在粮农组织活动期间的监管 胎儿发育不仅对胎儿生命很重要，而且 对成年期健康和疾病的影响。粮农组织的衡量标准 因此，活动为病理生理学和病理学提供了有价值的见解 许多疾病的代谢基础。

检测精灵非放射性 粮农组织的测定基于底物辛酰辅酶A的氧化。生成 NADH与四唑盐INT还原为甲胺素偶联。 红色甲臜的强度与粮农组织的增加成正比 活动。测定溶液和底物应等分储存在 -80°C.

Assay Genie检测精灵脂肪酸氧化检测试剂盒是一种高度灵敏的试剂盒 用于定量测量脂肪酸的比色法 细胞和组织中的氧化。

这种独特的检测方法利用 高可溶性辛酰辅酶A底物，可实现 脂肪酸氧化与长链低溶性的测量 底物如18C不饱和脂肪酸油酸酯。

上图：脂肪酸氧化测定：组织 裂解物由健康的仓鼠心脏和 与心力衰竭相关的TO2仓鼠模型。裂解物 用于测定和脂肪酸氧化水平 量化。

下图：脂肪酸氧化测定： 辛酰辅酶A是底物，而不是反应的产物。请 见图。

细胞/组织提取物的制备：

1.用冰冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤~106细胞两次， 并从细胞沉淀中完全去除PBS。细胞沉淀应 储存在-80ºC.组织样品应用PBS彻底洗涤至 去除血细胞，这可能导致检测结果不一致。

2.通过稀释 1x 细胞裂解液制备足够的 10x 细胞裂解液 用冰冷的dH 2 O溶液。加入 50 – 100 μl 冰冷的 1x 细胞裂解 细胞沉淀溶液。通过上下移液提取细胞 （温和但彻底）。将裂解物留在冰上5分钟 间歇性轻微激动。如果裂解物是粘稠的，添加更多的1x细胞 裂解溶液并重复移液。在 以最大速度冷藏微量离心机5分钟。回收上清液 用于测定。将组织在 1x 细胞裂解液中匀浆，并裂解 通过离心澄清。每 25.0 毫升 5x 使用 ~1 毫克组织 用于组织匀浆的细胞裂解溶液。

3.进行蛋白质测定以确定样品蛋白质浓度。 通过用冰冷的 1x 稀释来标准化样品蛋白质浓度 细胞裂解液至1 – 3毫克/毫升。将蛋白质样品完全保存在冰上 次。冻融的粗蛋白裂解物可表现出酶还原 活动。裂解物应储存在-80ºC。 注意：不要使用缓冲液 含有还原剂或SDS。

试剂解冻：

将解冻的粮农组织化验溶液和20倍粮农组织底物放在冰上。轻轻搅拌 移液前的溶液。重要的是要尽量减少时间 试剂解冻。使用后立即冷冻溶液。

对照溶液和反应溶液的制备：

1.对照溶液由1份dH 2 O和20份混合制备 粮农组织化验解决方案，例如25μldH 2 O与500μlFAO化验混合 溶液。测定过程中将新鲜制备的对照溶液保持在冰上。

2.反应溶液通过混合1份20x FAO底物和 20份粮农组织化验溶液，例如25μl 20x粮农组织底物与 500μl粮农组织测定溶液。将溶液放在冰上并立即使用。 每个蛋白质样品用50μl对照溶液和50μl处理 反应溶液分为两组。

Assay Genie检测精灵脂肪酸氧化检测试剂盒的应用

研究健康和病理状态（脂质代谢）的代谢途径和过程。

信号转导途径的研究。

遗传性疾病的研究，例如脂肪酸氧化障碍（FAODs）*。

心血管疾病的研究，例如心力衰竭。

胎儿发育过程中细胞能量代谢的研究。

脂肪酸氧化在癌症代谢中的影响。

*此试剂盒仅供研究使用，不能用于诊断 人类疾病。

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