Assay GeniePlex 鼠Th1/Th2/Th17 18 重（96 次测试）方案

Assay GeniePlex 鼠Th1/Th2/Th17 18 重（96 次测试）概述：

名称：精灵小鼠 Th1/Th2/Th17 17-重

编号：MOAMPM015

反应： 鼠

分析物： GM-CSF， IFN-ΓA， IL-1-Alpha， IL-1-Beta， IL-2， IL-4， IL-5， IL-6， IL-10， IL-12p70， IL-13， IL-17A， IL-21， IL-22， KC， TNF-Alpha， TSLP

灵敏度（LOD）： 基因-脑脊液： <5 皮克/毫升， 国际毒性丙种： <0.5 皮克/毫升， IL-1-α： <2 皮克/毫升， IL-1-β： <2 皮克/毫升， IL-2： <2 皮克/毫升， IL-4： <0.5 皮克/毫升， IL-5： <5 皮克/毫升， IL-6： <3 皮克/毫升， IL-10： <2 皮克/毫升， IL-12p70： <1 皮克/毫升， IL-13： <5 皮克/毫升， IL-17A： <1.5皮克/毫升，IL-21：<5皮克/毫升，IL-22：<5皮克/毫升，KC：<1皮克/毫升，TNF-α：<0.5皮克/毫升，TSLP：<2皮克/毫升。

样品类型：细胞培养上清液、血清、血浆、体液和组织/细胞裂解物

检测类型：多重

检测方法：流式细胞术

检测时间：2小时

Assay GeniePlex 鼠Th1/Th2/Th17 18 重（96 次测试）示例协议：

1. 准备滤板模板。标记标准孔、样品孔和空白孔。标准品和样品应一式两份或一式三份运行。如果整个板不使用，请用板密封密封未使用的井。

重要提示：在整个测定过程中将滤板放在滤板盖的顶部，以防止在任何表面上接触板底。

2. 涡旋工作珠悬浮15秒。

3. 向每个孔中加入 45 μL 捕获珠工作悬浮液。

注意：保存剩余的捕获珠工作悬浮液，并在2-8°C下储存，并有光保护。它可用于在流式细胞仪上设置采集参数。

4. 使用连接到真空源的“流通式”滤板清洗机去除孔中的缓冲液，该真空源已根据滤板清洗机说明进行调整。

5. 使用连接到真空源的“流通式”滤板清洗机去除孔中的缓冲液，该真空源已根据滤板清洗机说明进行调整。

6. 向每个样品孔中加入 30 μL CCS、SPB 或 TL 检测缓冲液。

注意：如果预计细胞因子水平非常低（小于20 pg/mL），则可以在不稀释分析缓冲液的情况下运行细胞培养上清液样品。如果是这种情况，请跳过此步骤，在步骤 45 中向每个样品孔中加入 7 μL 细胞培养上清液样品。

7. 向每个样品孔中加入 15 μL 样品。向每个标准品孔中加入 45 μL 标准品。用板密封盖住板。

8. 在室温下在摇床（设置为700rpm）上孵育60分钟。用铝箔包裹滤板避光。

9. 取下板封。使用连接到真空源的过滤板清洗机去除孔中的溶液。

10. 使用连接到真空源的过滤板清洗机去除孔中的溶液。

11. 使用滤板清洗机用100μL 1x洗涤缓冲液洗涤孔三次。

12. 在最后一次洗涤后，将板底轻轻敲打在几层纸巾上，以去除板底残留的缓冲液。

13. 向每个孔中加入 25μL 生物素化抗体工作溶液。用板密封盖住板。

14. 在室温下在摇床（设置为700rpm）上孵育30分钟。用铝箔包裹滤板避光。

15. 取下板封。使用滤板清洗机去除孔中的溶液。使用滤板清洗器用 100 μL 1x 洗涤缓冲液洗涤孔 <> 次。

16. 在最后一次洗涤后，将板底轻轻敲打在几层纸巾上，以去除板底残留的缓冲液。

17. 向每个孔中加入 25μL 链霉亲和素-PE 工作溶液。用板密封盖住板。

18. 在室温下在摇床（设置为700rpm）上孵育20分钟。用铝箔包裹滤板避光。

19. 取下板封。使用滤板清洗机去除孔中的溶液。用 100 μL 1x 洗涤缓冲液洗涤孔两次。

20. 将板底轻轻敲打在几层纸巾上以去除残留溶液。根据流式细胞仪的样品加载机制，向每个孔中加入 150μL 至 300μL 1x 读数缓冲液，以重新悬浮磁珠。用板密封盖住板。

21. 将板放在微量滴定振荡器上，以30rpm摇动700秒。

注意：如果流式细胞仪没有 96 孔板加载器，并且需要超过 200 μL 的 1x 读数缓冲液来重新悬浮磁珠，请不要摇动板。用P6移液器上下移液8至200次，将磁珠重新悬浮在每个孔中，然后转移到试管中进行采集。取下板封。在流式细胞仪上读取。

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