快速内切酶ClaI:能够在5~15分钟内消化DNA

上一篇 / 下一篇  2023-08-29 16:00:22/ 个人分类:生化试剂

快速内切酶ClaI是一系列能够快速消化DNA的工程限制性酶。所有快速内切酶ClaI在通用CutOne中显示出优异的活性™ 和CutOne™ 彩色缓冲液,能够在5~15分钟内消化DNA。这使得任何限制性酶的组合都能在一个反应管中同时工作,并消除了连续消化的需要。快速内切酶ClaI已通过多项严格的质量控制,可用于消化质粒、基因组和病毒DNA以及PCR产物。CutOne™ Color Buffer包括密度试剂以及红色和黄色跟踪染料,可以将反应混合物直接装载在凝胶上。CutOne的红色染料™ 彩色缓冲液在1%琼脂糖凝胶中与2.5kb双链DNA片段一起迁移,黄色染料在1%琼脂凝胶中与10bp双链DNA碎片一起迁移。

 

艾美捷快速内切酶ClaI

Cat #: C-BSM532

Size: 50 rxns

Storage: -20°C

 

快速内切酶ClaI组成:

41.png

 

推荐反应条件

1xCutOne“缓冲液;在37°C下培养;

热灭活

80°C下培养20分钟。

 

质量控制

功能测试

在含有1μgλDNADam)和1μl FlyCut“”ClalCutOne“”缓冲液中,在37℃下孵育15分钟,反应20μl,琼脂糖凝胶电泳测定完全消化。

长时间培养/星形活性测定

在含有1μgλDNADam)和1μl FlyCut“”ClalCutOne“”缓冲液中,在37℃下孵育3小时,反应20μl,通过琼脂糖凝胶电泳测定,结果是DNA模式没有可检测的核酸酶降解。较长的孵育时间可能导致星形活性。

结扎和清算

37°C下用FlyCutClal消化10倍后,在22℃下,>95%DNA片段可以与T4 DNA连接酶连接。在这些连接的片段中,通过琼脂糖凝胶电泳测定,>95%可以用FlyCut”“Clal重新切割。

非特异性核酸内切酶活性

在含有1μg超螺旋质粒和1μl FlyCut“”ClalCutOne“”缓冲液中,在37℃下孵育4小时,反应20μl,通过琼脂糖凝胶电泳测定,转化为刻痕或线性形式的转化率<10%

 

蓝白筛选法

1μl FlyCut酶切lacZα基因载体™ ClaI。将酶解产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有X-GalIPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上,成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落,而中断基因(即降解的DNA末端)产生白色菌落。飞剪™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。

 

https://www.amyjet.com/products/C-BSM532-50rxns.shtml


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