内切酶EcoRI, 无动物源性使用方法
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下一篇 2023-09-04 16:33:45/ 个人分类:生化试剂
内切酶EcoRI, 无动物源性背景:
经过基因工程改造的EcoRI,ADCF,能够在5~15分钟内消化DNA。它可用于鉴定质粒DNA、PCR产物和基因组。EcoRI,ADCF具有以下特点:在5到15分钟内快速消化,极好的酶活性冗余,易于处理底物过量或具有挑战性的模板消化。这种酶不含动物来源的成分
艾美捷内切酶EcoRI, 无动物源性:
Cat #: C-BSM2504S
Size: 5000 U
Storage: -20°C
内切酶EcoRI, 无动物源性组成:
单位定义:
一个单位定义为在37°C、50µL推荐反应缓冲液中1小时内消化1µgλDNA所需的EcoRI量
热灭活
在80°C下培养20分钟。
质量控制
净化
SDS-PAGE检测结果大于95%。
核酸内切酶残基
将20U的EcoRI与超螺旋质粒DNA在37°C下孵育4小时,DNA电泳中未检测到质粒的变化。
蓝/白筛选试验:
用1μl EcoRI消化含有locZa基因的合适载体。将消化产物连接并转化到大肠杆菌感受态细胞中。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上,成功门控的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落,而中断的基因(即降解的DNA末端)产生白色菌落。ADCF限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。
DNA酶残基
将20U的EcoRI与双链DNA在37°C下孵育16h,DNA电泳未检测到DNA的变化。
RNase残基
将20U的EcoRI与RNA在37℃下孵育1小时,电泳中未检测到RNA降解
结扎和清算
在最佳反应温度下用20U的EcoRI消化后,DNA片段可以在22°C下与T4 DNA连接酶(Fast)连接。在这些连接的片段中,通过琼脂糖凝胶电泳测定,大多数片段可以用EcoRl重新切割。
宿主DNA残基:
通过对大肠杆菌16S rDNA特异性的TaqMan-qPCR检测酶溶液中的核酸残基,检测到少于10pg的大肠杆菌基因组残基。
宿主蛋白残留:
通过ELISA测定大肠杆菌宿主蛋白低于50ppm。
无菌:
未检测到大肠杆菌。
内毒素残留量:
<10 EU/mg
https://www.amyjet.com/products/C-BSM2504S-5000U.shtml
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TAG: 无动物源性内切酶ecori