PMA-qPCR/Viability PCR工作原理&相关推荐

PMA是比较中肯的v-PCR 染料，并已在数百份同行评审的论文和大量细菌、真菌和病毒菌株中得到验证。早期研究侧重于细菌中的v-PCR，验证了在数十种不同细菌菌株中的程序，例如大肠杆菌、李斯特菌、军团菌、乳酸杆菌、结核分枝杆菌、衣原体、幽门螺杆菌以及许多其他与人类健康相关的菌株. v-PCR 在细菌中的应用非常广泛，但也有许多引文在酵母和真菌、病毒以及各种其他细胞类型（如古生菌、变形虫和寄生虫）中使用 v-PCR。

已验证的Viability PCR应用实例：

微生物组研究

环境测试

益生菌研究

临床测试

食品和水卫生

葡萄酒发酵

微生物测序

V-PCR的工作原理

PMAxx 和PMA是对DNA具有高亲和力的光活性染料。染料插入dsDNA并在暴露于强烈可见光时形成共价键。该反应通过在纯化过程中去除修饰的DNA和通过DNA聚合酶抑制模板扩增的组合来抑制修饰的DNA模板的PCR扩增。由于染料是细胞膜不可渗透的，当用染料处理含有活细菌和死细菌的样品时，只有细胞膜受损的死细菌才容易受到DNA修饰。在qPCR反应中，死细胞DNA将显示出延迟扩增和比活细胞更高的Ct。

活性PCR染料，如PMAxx 或PMA是膜不渗透的，这使它们具有死细胞特异性。一旦进入死细胞，它们就会与DNA结合。暴露在强烈的可见光下会使染料具有活性，并使它们共价附着在DNA上，这种DNA修饰防止了随后的PCR反应中的扩增。

v-PCR工作流程：

v-PCR的基本工作流程如下图所示（详细协议可在产品页面上找到）。它适用于许多不同的样本类型和实验设置。对于少量培养物，样品可以在微型离心管中制备，并在PMA-Lite 2.0 LED光解装置中暴露在光下。

艾美捷 Viability PCR入门套件

可定制的 Viability PCR 入门套件包含使用 PMA 或 PMAxx 活力染料和 qPCR 选择性检测活细胞所需的材料。这些试剂盒可用于您选择的任何细胞类型（有关已发布的经过验证的细胞类型，请参阅PMA/PMAxx 参考列表和经过验证的细菌菌株列表）。所有试剂盒均包含 Forget-Me-Not EvaGreenqPCR Master Mix，以及您选择的 PMA 或 PMAxx 染料。您还可以选择带有或不带有革兰氏阴性细菌增强剂（不适用于其他细胞类型）的试剂盒。用户将需要提供自己的引物来扩增他们感兴趣的物种（请参阅此 博客文章 用于引物设计考虑）。每个试剂盒包含的试剂足以处理 80 种细菌培养物并进行200次PCR反应。

试剂盒包括：

PMA 染料或 PMAxx 染料

Forget-Me-Not EvaGreen qPCR预混液

ROX 参考染料

PMA 增强剂（仅限革兰氏阴性菌株）

相关推荐：

名称 货号 活性染料

Viability PCR Starter Kit with PMA 31075

Viability PCR Starter Kit with PMAxx 31075-X

Viability PCR Starter Kit with PMA and Enhancer 31076

Viability PCR Starter Kit with PMAxx and Enhancer 31076-X

https://www.amyjet.com/featured/PMA-qPCR.shtml