超灵敏细胞计数试剂盒-8（CCK-8）通过利用高度水溶性的四唑盐-WST-8进行非常方便的测定。WST-8被细胞中的脱氢酶还原，产生橙色产物（甲赞），可溶解在组织培养基中。CCK-8是非放射性的，允许在细胞增殖和细胞毒性测定中进行灵敏的比色测定，以测定活细胞的数量。细胞中甲酰胺的含量与活细胞的数量成正比，可用于检测细胞增殖和细胞毒性。使用CCK-8的检测灵敏度高于使用其他四氮唑盐如MTT、XTT、MTS或WST-1的检测灵敏度。
艾美捷超敏型细胞增殖检测试剂（CCK-8）：
Cat #: D-AKE106
Size: 1000T / 10000T
Storage: Stored at 4°C for 12 months, and at -20°C for at least 24 months, protected fromlight
超敏型细胞增殖检测试剂（CCK-8）化验程序
注：在实际实验之前，做一个预实验，以确定合适的细胞数量和培养
时间如果OD值过高，可以适当减少细胞数量，加入CCK-8的孵育时间
可以缩短或者可以减少CCK-8的装载量。
一、标准曲线绘制
1.用细胞仪计数制备的细胞悬浮液中的细胞数量，然后接种细胞。
2.用培养基稀释细胞，按顺序形成细胞浓度梯度，通常为5-7个细胞浓度梯度、每个浓度梯度4-6个多孔。
3.接种后，将粘附细胞或悬浮细胞孵育0.5-4h，每100μL培养基加入10μL CCK-8试剂孵育一定时间，然后测量ODaso值。以单元格数为x轴，以ODaso值为y轴，绘制标准曲线。根据该标准曲线，可以确定未知样品中细胞的数量。使用该标准曲线的前提条件是试验条件完全相同。
l细胞活性测定方案
1.在96孔板中接种细胞悬浮液（100μL/孔）。将培养板放入湿润的二氧化碳培养箱中进行预培养。
2.在板的每个孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要将气泡引入井内，因为它们会干扰外径读数。
3.将培养板在培养箱中培养0.5-4小时。培养时间取决于实验条件，如细胞类型和细胞密度。
4.使用微孔板读数器测量450 nm处的吸光度。
II细胞增殖和细胞毒性测定方案
1.在96孔板中分配100μL细胞悬浮液（5000个细胞/孔）。将平板在除湿二氧化碳培养箱中预孵育24小时。
2.将1-10μL不同浓度的待测物质加入平板中。
3.将培养板在培养箱中培养适当的时间长度（例如，6、12、24或48小时）。
4.在板的每个孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要将气泡引入井内，因为它们会干扰外径读数。
5.将培养板在培养箱中培养0.5-4小时。培养时间取决于实验条件，如细胞类型和细胞密度。
6.使用微孔板读数器测量450 nm处的吸光度。
数据分析
细胞活力=[（A-As）/（Ac-Ao）]×100%
抑制率=[（A-A₂)/（Ac-Aa）]×100%
A： 实验孔的吸光度（包括细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液）；
Ac：对照孔的吸光度（包括细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物）；
An：空白孔的吸光度（包括培养基、CCK-8溶液，不含细胞和药物）。
注意事项：
1.由于CCK-8的低毒性，CCK-8检测后的细胞可用于其他细胞测定。
2.如果OD值过低，请在加入CCK-8后适当增加细胞数量或延长培养时间。
3.试剂盒依赖于脱氢酶催化的反应，影响活细胞脱氢活性的条件或化学物质会干扰检测。如果培养基的颜色或pH因长期培养而发生变化，请在添加CCK-8时更换培养基。
FAQ：
1.本品敏感，OD值偶尔偏高。我们应该如何处理？
从三个方面进行调整：
1）使用不同数量的细胞进行检测，制作标准曲线，确定合适的细胞数量；
2）缩短CCK-8的孵育时间；
3）减少CCK-8的装载量，将CCK8稀释至合适的浓度使用。
2.如何确定该产品的检测范围？
建议制作不同细胞数的标准曲线，并根据稳定的线性趋势确定特定细胞的检测间隔。
3.如何设置细胞毒性测试？
有两种设置方式：
1）在100μL细胞悬浮液中加入1-10μL不同浓度的待测物质，孵育适当时间，然后加入10%的系统溶液。
2）在药物暴露于细胞一段时间后，使用10%CCK-8检测细胞增殖。
https://www.amyjet.com/products/D-AKE106-U-1000T.shtml
