EZElisa甲状腺素(T4) ELISA试剂盒样品制备&操作步骤

T4是诊断甲状腺功能减退和甲状腺功能亢进的有用标志物。甲状腺素T4在甲状腺功能减退患者中水平降低，在甲状腺功能亢进患者中水平升高。血液中的主要甲状腺激素形式是甲状腺素（T4），其半衰期比T3长。T4在细胞内通过去碘酶（5'-碘酶）转化为活性T3（比T4更具效力的三到四倍）。这些进一步经过脱羧和脱碘反应，产生碘代胺（T1a）和甲状腺胺（T0a）。去碘酶的三个同功酶都是含硒酶，因此膳食中的硒对T3的产生至关重要。Edward Calvin Kendall于1915年首次分离出甲状腺素。EZElisa™ Thyroxine (T4) ELISA Kit采用竞争性抑制酶免疫测定技术。试剂盒中提供的微孔板已经预涂有特异性抗T4的抗体。将标准品或样品与生物素结合的T4加入相应的微孔板孔中，T4（标准品或样品）与预涂的特异性抗体结合的生物素结合的T4之间会发生竞争性抑制反应。样品中T4的含量越多，与生物素结合的T4结合的抗体越少。洗涤后，加入Avidin-HRP到孔中。加入底物溶液后，颜色的发展与样品中T4的含量相反。停止颜色的发展并测量颜色的强度。

艾美捷EZElisa甲状腺素(T4) ELISA试剂盒基本参数：

目录号：D-AEK0007

规格：48T/96T

储存：未开封的试剂盒应在4°C下保存12个月。

检测范围：20 ng/mL-320 ng/mL

灵敏度：10 ng/mL

特异性：EZElisa™ Thyroxine (T4) ELISA Kit对T4的检测具有高灵敏度和优异的特异性。未观察到T4与类似物之间的显著交叉反应或干扰。

适用样品：血清、血浆

供应材料和储存条件：

Note: Std1: 20 ng/mL; Std2: 40 ng/mL; Std3: 80 ng/mL; Std4: 160 ng/mL; Std5: 320 ng/mL.

EZElisa甲状腺素(T4) ELISA试剂盒试剂制备：

注意：在使用前，将所有试剂平衡至室温。如果缓冲液浓缩物中出现结晶，请轻轻加热它们直到完全溶解。1×洗涤缓冲液：将洗涤缓冲液（20×）用去离子水稀释1：20，得到1×洗涤缓冲液。储存在4°C。

样品制备：

1. 血清：使用血清分离管，在室温下使样本凝结30分钟，然后以1,000 g的速度离心15分钟。立即取出血清进行检测，或将样本分装并储存在-20°C。避免重复冻融循环。

2. 血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸作为抗凝剂采集血浆。在采集后30分钟内以1,000 g的速度离心15分钟。立即进行检测，或将样本分装并储存在-20°C。避免重复冻融循环。

注意：不要使用明显溶血或脂质混浊的样本。如果样本将在24小时内使用，可以储存在2至8°C。避免重复冻融循环。在进行检测之前，应将冷冻样本缓慢恢复至室温，并轻轻混合。

EZElisa甲状腺素(T4) ELISA试剂盒操作步骤：

1. 从板框中取出多余的微孔条，放回含有干燥剂包装的铝箔袋中，并重新密封。

2. 每个孔加入50 μL的T4标准品或样本。建议将所有标准品和样本都复制加入微孔板中。设置一个空白孔，不加入任何溶液。

3. 向每个孔中加入50 μL的生物素结合的T4（不加入空白孔）。充分混合后，用提供的孔板盖覆盖，然后在37°C下孵育1小时。

4. 倒出每个孔中的液体并进行洗涤，总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动微孔板洗涤器，将每个孔填满1×洗涤缓冲液（250 μL），静置10秒钟，每个步骤完全去除液体对于良好的性能至关重要。在最后一次洗涤后，倒转孔板并用干净的纸巾轻轻擦干任何剩余的1×洗涤缓冲液。

5. 向每个孔中加入50 μL的亲和素-HRP（不加入空白孔），充分混合后，用提供的孔板盖覆盖。在37°C下孵育30分钟。

6. 重复第4步中的洗涤步骤。

7. 向每个孔中加入50 μL的底物A和50 μL的底物B，充分混合后，用提供的孔板盖覆盖。在37°C下孵育15分钟。将孔板放在无风处并避免光照。

8. 向每个孔中加入50 μL的停止溶液。停止溶液应按照HRP底物的顺序加入孔板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色是绿色，或者颜色变化不均匀，请轻轻敲击孔板以确保充分混合。

9. 在30分钟内使用设置为450 nm的微孔板读取器测定每个孔的吸光度。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

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