总胆固醇 (TC) 检测试剂盒在生物研究中的应用

总胆固醇（TC）包括游离胆固醇和胆固醇酯。组织中的总胆固醇是指组织中所有脂蛋白中所含的胆固醇的总和。EZMeta™总胆固醇（TC）比色法检测试剂盒提供了一种简单的方法，用于检测血清、血浆、动物组织、细胞和细菌等多种生物样品中的TC浓度。在检测过程中，酯酶催化胆固醇酯的水解，产生游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA）。然后，胆固醇氧化酶催化FC产生Δ4-胆甾酮和H2O2。进一步，H2O2、4-氨基苯酚和苯酚过氧化物酶可以催化生成具有特征吸收峰位于500 nm处的红色醌化合物，其颜色深浅与TC含量成正比。

艾美捷 总胆固醇 (TC) 检测试剂盒：

货号：D-AKC2220

规格：48T / 96T

储存条件：储存于4°C，避光，保存时间为12个月

适用样品：血清、血浆、动物组织、细胞、细菌

所需材料但不提供：

·能够测量500 nm处吸光度的微孔板读板仪或可见光分光光度计

·96孔板或微玻璃比色皿，精密移液器，一次性移液头

·冰制冰机，冷藏离心机，水浴

·无水乙醇 ·匀浆器（用于组织样品）

总胆固醇 (TC) 检测试剂盒试剂准备：

TC工作溶液：按照提供的使用方法直接使用。使用前将其平衡至37°C。储存在4°C。

标准品：按照提供的使用方法直接使用。使用前将其平衡至室温。储存在4°C，避光。

标准曲线设置：将2 µmol/mL的标准品用无水乙醇稀释至下表所示的1、0.5、0.25、0.125、0.063、0.031 µmoL/mL。

总胆固醇 (TC) 检测试剂盒样品准备：

注意：推荐使用新鲜样品。若不能立即测定，样品可以在-80°C下储存一个月。

1. 动物组织：称取约0.1克组织，加入1 mL无水乙醇。在冰上均质化。以8,000 g的速度离心10分钟，温度为4°C。使用上清液进行测定，并将其放在冰上待测。

2. 细胞或细菌：收集5×10^6个细胞或细菌放入离心管中，在离心后弃去上清液；加入1 mL无水乙醇，在冰浴中超声处理细胞或细菌5分钟（功率20%或200 W，超声3秒，间隔7秒，重复30次）。以8,000 g的速度离心10分钟，温度为4°C。使用上清液进行测定，并将其放在冰上待测。

3. 血清（血浆）样品：直接进行测试。注意：如果通过蛋白质浓度计算含量，最好使用EZMeta™总胆固醇（TC）比色测定试剂盒对总蛋白质进行定量。

总胆固醇 (TC) 检测试剂盒典型数据：

注意：计算公式，包括推导过程和最终公式。这两个公式完全相等。建议使用粗体的简洁计算公式作为最终公式。

1. 绘制标准曲线

以标准溶液浓度为纵坐标，ΔA标准为横坐标，绘制标准曲线。将ΔA待测值代入方程得到y值（µmoL/mL）。

2. 计算样品中的TC含量

（1）根据样品的新鲜重量

TC（μmol/g）= y ÷（W÷V提取）× n = y ÷ W × n

（2）根据蛋白质浓度计算

TC（μmol/mg蛋白）= y ÷ Cpr × n

（3）根据细胞或细菌数量计算

TC（μmol/10^4）= y ÷（细胞或细菌数量÷V提取）× n = y ÷ 500 × n

（4）根据液体体积计算

TC（μmol/mL）= y × n

其中：W：样品重量，克；V提取：添加的无水乙醇体积，1 mL；n：稀释倍数；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌的总数，5×10^6。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途