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有关基因高效快速表达的技巧和探讨

上一篇 / 下一篇 2009-11-09 15:38:20

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基因高效快速表达试剂盒

（菌种部分修改TOP10为JM109，冻干菌种变为穿刺菌种！）

（第四版）

名称 基因高效快速表达试剂盒

货号 2001-1K

包装规格 一家实验室购买一套可永久无限次使用

试剂盒组成（1）9种表达载体

（2）2种冻干菌种

（3）2种抗生素

一、产品简介

二、基因克隆

三、基因表达

四、载体资料

五、相关产品(详细资料请来电索取

:13788987962 杨先生 021-50272977-6221)

六、参考文献

七、试剂盒质量验收标准

一、产品简介

原核表达系统近年来研究取得突破性进展

1998年，美国Incyte Pharmaceutical公司华裔科学家Zhang Yang在《Protein expression and purification》(vol12,159-165)上发表论文《Expression of Eukaryotic proteins in soluble form. in Escherichia coli》，文章采用E.coli分子内伴侣DsbA技术将IGF-I、IGFBP-3、3Cproteinase、TGFb-2、STGFb-RII、BDNF、GDNF、mEGFBP、Leptin和GFP十个基因全部实现了可溶性表达，且表达量均大于25%。更为惊奇的是由于DsbA分子伴侣的作用使得拥有9个半胱氨酸的复杂结构的IGFBP-3能在E.coli内形成可溶性具生物活性的高表达重组蛋白。

2002年，美国冷泉港实验室出版的《Protein Science》(2002,11:313-321)上发表了瑞典科学家Torleif《Rapid screening for improved solubility of small human proteins produced as fusion proteins in Escherichia coli》一文，从而揭开了原核高效快速组合筛选表达系统用于蛋白组学研究的序幕。

近年来Medline报导了大量利用原核表达获得有活性的可溶蛋白，现举例如下：

Gene	Expression method	Index
Proinsulin	DsbA fusion	J.Biotechnol 2001 84(2):175-85
htPA	DsbA coexpression	Appl Environ Microbiol 1998 64(12):4891-6
Bovine enterokinase	DsbA fusion	Biotech nology(NY),1995,13(9):982-7
Mucin	MBP fusion	Protein Expr Purif 1999,15(1)146-54
Human angiogenin	OmpA signal	Biochem Mol Biol Int1999,47(2):267-73
Bacillus lipase	OmpA signal	Appl Microbiol Biotechnol 1998 Apr;49(14):405-10
HEV antigen	Thioredoxin fusion	Zhonghua shi yan he lin chuang bing du xue za zhi 2002,16(1):20-2
P55 TNF receptor	Thioredoxin fusion	Protein Expr purif 2001,23(2)226-32
hLH/CG receptor	Thioredoxin fusion	Endocrine 2001,14(2):205-12
Pokeweed antiviral protein	MBP fusion	Protein Expr Purif 1999,15(1)146-54

产品特色

上海西宝生物科技有限公司通过和留美学者合作，现向国内推出原核基因高效快速表达试剂盒。它将九种表达载体包括分泌型、引导分泌型、胞内直接表达型、分子内伴侣协助折叠型、高度稳定伴侣型等系统的多克隆位点统一，同时统一了诱导表达剂和统一了培养基，一次可以同时克隆九种载体进行表达筛选，极大地节省宝贵的科研时间。其实，象美国Amgen、Gentech、Incyte这类顶尖的生物技术公司也是采用多系统多载体同时筛选快速表达的策略。这一策略的最大优势就是快速且成功率高。本系统非常适合高通量快速筛选大量未知基因，对基因组学和蛋白组学的研究是一个不可缺少的工具。

1）冻干菌种可长期稳定保存。

2）提供详实的操作说明和丰富的参考文献。

3）下游多种亲和层析组合方便您快速纯化目的蛋白。

4）分子内伴侣和分泌表达能最大限度避免包涵体形成，直接获得有活性可溶蛋白，这一点对于未知基因功能的研究很重要。

5）九套高效表达载体同时克隆筛选极大地节省您宝贵的科研时间。

6）T7溶菌酶和lacI^q阻遏蛋白能起到严格控制诱导前表达的作用，同时强启动子、高拷贝复制子等方法结合可获得高达50%的表达量。

7）已有200多个基因通过该试剂盒表达成功。

本试剂盒包括冻干菌株、抗生素和统一多克隆位点的九种表达载体。用户只要扩增出一段不带终止密码子或带终止密码子的阅读框编码基因克隆进九种表达载体，可同时筛选，节省时间。一般两至三周可以筛选出表达菌株，在此基础上，进一步根据需要进行实验室菌株的优化从而成为工程菌株。