实用分子生物学方法总结

上一篇 / 下一篇  2010-05-04 11:12:09/ 个人分类：心得体会

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一：探讨细胞增值
1、H3-Thymidine incorporation/H3-Brdu incorporation (DNA)
2、H3-Leucine incorporation(Protein)
3、H3-Proline incorporation(Collagen)
4、PCNA immunohistochemistry/ Immunoflurescence
5、Cell counting
6、BrDu incorporation
二：细胞迁移与趋化
1、Modified Boyden Chamber
2、Matrigel invasive assay
3、Wound Scratch Assay
三：细胞凋亡
1、Hochest33342 immunostaining
2、TUNEL assay
3、Electroscopy apoptotic body (TEM)
4、DNA laddering
5、Bcl-2/ Bax ration determination
6、Flowcytometry- sub-diploid summit (PI)
7、Mitochondril membrane potential (JC-1 dye)
四：转染真核细胞
1、lipososome mediated transfection （By Lipotransfectamine reagent）
2、Adenovirus mediated transfection
3、Lentvirus mediated transfection
五：分析结合活性
1、EMSA assay(AP-1, SP-1, NF-kB, CREB)
2、CHIP assay
3、Luciferase report construct
4、Dominant negative assay
5、Radioimmunological assay (RIA)
六：分析基因及蛋白表达
1、RT-PCR/ Northern Blot/Real-time PCR（mRNA）
2、Western blot/ immnohistochemistry(Protein)
3、siRNA/ dominant negative plasmid/antisense oligonucleotide technology
4、Over-expression system
七：蛋白质相互作用
1、Immunopricipitation(IP)/Co-IP
2、GST pulldown assay
3、Y2H(Yeast 2 hybrid)
4、Interaction system between macromolecules
5、BiFC (Bi-fluorescent complementary technology)
八：氧化应激与脂质过氧化
1、MDA content、SOD activity、HNE
2、Catalase, GPx-1
3、DCF-DA staining
4、DHE staining

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TAG: 分子生物学

 

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