一. 常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺(Spermidine):
溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine)：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium
acetate)：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白
(BSA)：加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性，
须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白)，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于
-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT)：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium
acetate)：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl)：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium
acetate)：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L
EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L)，混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的
Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L
HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH(6.8-8.2)，然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml
IPGT：溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl2•6H2O于足量的水中，定容到100ml。
100mmol/L
PMSF：溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。
20mg/ml 蛋白酶K(proteinase
K)：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于
-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free
RNase)：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH
5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)
5mol/L 氯化钠(NaCl)：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠(NaOH)：溶解400g氢氧化钠颗粒于约
0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌)，氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠)：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol)：溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)
2.5%
X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)：溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管，贮存于
-20℃。
100×Denhardt试剂(Denhardt’s regent) 成分及终浓度
配制100ml溶液各成分的用量
2% 聚蔗糖(Ficoll，400型) 2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40) 2%BSA(组分V)
水 2g 2g 2g
加水至总体积为 100ml
,依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接) 成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L
贮液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L
盐酸亚精胺(可选):50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA(组分V)(可选):0.5ml 10 mg/mL 贮液 ,水:
2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。
100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液 成分及终浓度 配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP
10mmol/L dCTP
10mmol/L dGTP
10mmol/L dTTP
水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液
2ul 100 mmol/L dCTP 贮液
2ul 100 mmol/L dGTP 贮液
2ul 100 mmol/L dTTP 贮液
12ul
20%PEG 8000/2.5M NaCl
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20%聚乙二醇
2.5mol/L 氯化钠
水 20g
50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠
补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L 柠檬酸三钠(二水)
3mol/L 氯化钠
水 88.2g
175.3g
补足1L
溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N
NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi
条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionized formamide)
直接购买或加Dowex XG8
混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman
1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphate buffer)
按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L
磷酸氢二钠(双碱)贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L
的磷酸二氢钠(NaH2PO4•H2O)贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L
磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L 磷酸二氢钠(ml) 1mol/L 磷酸氢二钠(ml) 最终pH值
TE(用于悬浮和贮存DNA)
成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris-HCl
1mmol/L EDTA
水 1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0，25℃)
200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
98.8ml
Tris缓冲液(Tris-HCl buffer)
将
121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N)，用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积(ml) pH
