快速检测原理及操作简介

上一篇 / 下一篇  2012-07-27 14:39:41

  抗体检测中快速检测法由于其快速、简便、灵敏可靠等特点在抗体检测中得到广泛应用,在临床医学、牲畜疫病检疫、疫情调查、出入境防控等方面发挥着越来越重要的作用。 以金标法为例简单地说明:快速检测法原理是将抗原包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)上,将人工合成抗体包被在硝酸纤维素膜的对照线(C)上,用胶体金标记的抗原干燥后置于纤维膜下端。把样本加入加样孔内,由于层析的原理,血清样本开始沿纸条向上移动,当遇上干燥的金标抗原,将其溶解,并带着金标抗原继续往上移动,至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有抗体存在时,包被在检测线上的抗原和金标抗原与样品中的抗体将会在检测线上形成一条紫红色的夹心免疫复合物。除金标抗原外常用的还有硒标法等,基本原理相同。 如果检测线上形成复合色线,判为阳性;快速检测法适用于肉眼视觉判断,而非仪器读数鉴别,因此在设计上将检测线T处置于对照线C下端,样本要达到对照线处就必须先通过检测线,当检测线T与对照线C处都显现时就可以通过肉眼判断为阳性,而检测线未出现对照线出现时即可判断为阴性,也因此,对照线通常也被称为质控线,既为是否达到检测标准的检测结果质量控制依据。

  下面以HIV检测为例: 初期的HIV快速检测法试纸和试剂,需要在检测前操作附加抗原等准备工作。 90年代美国众多医疗机构和专家小组在非洲进行大范围艾滋病调查,获得丰富的调查资料,在实践中逐步改良检测方法和试剂包装。 超薄和耐热的包装十分适宜非洲当地环境和需要,除检测缓冲外不需要另外的设备予以辅助,两名医生组成的医疗小组可以携带3000份供偏远部落检查。这在医疗条件简陋的非洲多数地区十分适用,为真实调查掌握疫情提供了有效手段,在艾滋病研究史上起到非常关键作用。

  对艾滋病这种严重威胁人类生命的疾病的诊断也经历了从复杂到便捷的过程,在90年代后,世卫组织和众多研究机构对非洲大范围医疗援助中获得了大量临床资料,使医学界对艾滋病有了更为深入的认识,艾滋病的传染途径最终被确定,传染级别被降低,也不再被视为洪水猛兽。 可以说优秀的产品都来自实践第一线并直接服务于应用,美国雅培公司的这种设计也获得了专利。美国本土的诊断形式也因此得以改变,此前,美国本土依托广泛而强大的医疗支持体系以对艾滋病血清学检测以实验室手段为主,缺乏应急和快速的诊断手段。受专利法案制约,欧洲制药企业另行开发塑壳纸基试剂,使用不依靠其他缓冲或催化剂的检测工具,可以直接以全血和血清为样本,着重突出便捷性与美国系列产品各有千秋。在目前临床应用检测试剂内层是完整的试纸结构,外层以塑料外壳干燥封装,便于携带保存。

  使用简介:

  一,单独拿出试剂盒,放置10-30分钟 平衡温湿。

  二,采末梢血,并滴入加样孔中。

  常见问题:

  1,手指没有消毒怎么办?要不要酒精消毒? 答:清水洗干净即可,医疗环境下的消毒主要为防止交叉感染,自行采血检查未与外界接触,保持采血部位洁净即可。

  2,没有撇去第一滴血是不是不行?会不会不准了。 答:提示此步骤本身也是为了保证采血部位洁净,第一滴血和第二滴并没有本质不同,只要手指清洗干净不需要特别处理。

  3,是不是只能采指尖血,用其他部位血液可不可以? 答:自行采血选择指尖部位操作简单、创面小,容易愈合;有女性求助者询问是否可以用经期的血液做样本,事实上也没有本质不同。但是,经期血液中杂质较多黏性差异大,容易造成层析受阻。其中还有一个问题比较重要,不建议用经血并非不同部位血液就会带来不同结果,如果结果出现质控线,则结果仍然有效,否则为无效结果。有女性求助者反映两次适用经血检测都得到了可靠结果,但建议还是尽量采指尖血,便于操作且简单可靠。

  4,手指直接接触到了试纸是否危险?上边会不会有病毒,是不是被感染了? 答:这类问题本不该产生,但也有不少人缺乏必要的医学常识,艾滋病又是比较严重的疾病,带来心理压力较大,产生这种焦虑可以理解。首先试纸上不存在传染病毒,试剂是用来检测的工具,所提抗原抗体等字眼容易带来误解和压力,而事实上这些概念不能和病毒混淆。简单地说,试剂上只有人工控制过程合成的高分子蛋白质,本身具有活性,但不可能具备传染能力和复制能力,这和病毒概念有着本质区别。 其次,手指接触加样孔也没有任何危险性,因为有效药膜是包在检测线及对照线的内部,从外部不能接触到。而且更简单地说,加样孔就是纸基纤维,血液样本加入那里后是通过随后的扩散和层析才逐步到达药膜处,加样孔没有任何危险。为了避免这类恐慌,上图即为采血直接接触加样孔实验示例。

  5,如何避免采血恐惧? 答:根据临床心理学有关原理,部分人群存在血液恐惧或对采血场所设施或相关活动存在恐惧心理,与个人特质既个性由较大关系,通过提高认知水平有较大改善。对于个人而言除排除误解外可以采用回避的形式降低应激反应,尽量避免多余接触。

  提示:心理救助热线面对求助群体较为特殊,部分人群心理紧张幅度大、耐压性差,或具有多疑敏感的心理特征,易受主观条件刺激。 因此在经过一段时间的反馈后,热线在提供推荐检测试剂时尽量避免额外多余的刺激,试剂本身为独立密封包装不存在污染问题,采血针为一次成型注塑制成,使用前不会与外界有任何接触。如仍有疑虑可自行使用消毒过的细针等轻刺皮肤采血,但尽量避免这样做,因为采血用针与普通缝纫针造型不同,具有一定的锋角,较生活中的缝衣针更易使用且痛感小。除此之外不再提供任何附属品,防止因为有污染可能性而带来疑虑。

  三,观察结果 血液放入后平放于桌面,由于样本粘稠度不同,扩散层析到最终出现结果时间3-20分钟不等。加样要求为40微升左右,经验证明,在重力作用下的两滴血液即可保证这个要求用量,这一标准便于普通患者掌握。自行检测患者易担心结果是否可靠,部分患者也会担心稀释会影响检测效果,所以建议采血时应足量加样,正常血质流动性都可保证较好扩散,无须过量稀释。 如血质稍粘稠可在加样后放入一滴纯净水,增强样本流动性加快扩散效果。

  1,有部分患者疑虑只加入水不加入血液会不会也显示阴性?要不要加入其他稀释液体? 答:不会。自备水没有任何化学成分,对检测过程不会有任何直接影响,加入样本后再加入一滴水只有助于纸基纤维充分扩散,而不是改变检测性质。另外,如果先加入过多的水分,可能使纸基纤维吸收饱和,之后再加入样本反而影响吸收速度,那就相当于试剂受潮后的效果,虽不改变检测性质但影响反应进程。

  在实验室环境,检测样本多工序液多,样本使用专用稀释液为防止长时间等待过程的凝结,这一程序属于配置。而自行检测时只针对一份任务,新鲜血液直接滴入加样孔并不需要额外抗凝。相反,一些患者在使用原有稀释液后又对是否影响检测产生疑虑,更有甚者认为加某某种成分稀释液才能正确显示,否则检测出阴性也不准确,这样的看法匪夷所思,如果果真如此那么检测的样本就应该是直接导致检测结果呈现的物质,也就是说那样检测的样本将是稀释液而不是血液。应区别与其他快速检测法缓冲概念。

  综合建议:为避免各种对加样过程是否影响检测的疑虑,全血检测足量加入血液,为便于显示可在滴入样本后在加样孔添加一滴干净的水,以助于层析和清楚显示结果。结果是否可信应以是否出现对照线(质控线C)处为标准,既如样本受外界因素影响无效质控线则不出现,质控线显现则阴性或阳性结果有效。

  判度结果: 首先应当看质控线是否显现,C处标记为质控线,实验设计中样本达到C处并显现需先通过检测线 快速检测的结果由肉眼视力判读,因此也带来缺点是容易受个体主观因素的影响,在紧张情绪下某些患者也有可能将阴性误认为阳性。但阳性结果显现不会误认为阴性。 由于血液中含大量红细胞常温常态下呈现为红色液体,这一点与血清不同,血液在纸质基板扩散过程有可能出现色差,比如不特定形状的絮状痕迹,这些现象完全正常。随着扩散程度的进展,常温下5-20分钟纸纤维板上红色痕迹最终稳定。由于血质差异和扩散程度不同,检测线红色深浅不一,有些色泽淡些,有些呈现紫红、紫黑色,都属于正常现象,与定性结果无关;试纸表面呈现淡红色说明受血液浸透也都属于正常现象。阳性样本检测线T处显现程度与对照线C相同,这也是对照线的另一个意义。 检测阴性结果后会不会随后又变成阳性?要看结果到多长时间?是不是几小时不用就失效或不准了? 答:有不少说明会提示30分钟后结果无效,但是普通使用者并不真正理解。简单地说,检测结果显现后有样本有可能还在扩散,这时药膜的反应已经完成并停止,而样本血液在纸基上的扩散可能还未停止,有时会有可能影响观察。放置后无效并不是指试剂检测“失效”而是指不利于观察,判度易受干扰。对于使用者而言,只需要了解对照线(质控线)的作用,阳性结果会和对照线同样显现,并不会和观察者捉迷藏,等到不看的时候又出现,其关键是心态平和。

  特别提示:此快速法检测为初筛性质,以灵敏性要求占优,特异性要求略低。如为阴性结果可以说明样本中无HIV抗体,而阳性结果则不能认定存在抗体,更不能直接认定为已感染患者,需进一步进行特异性实验证实。对此,检测者需有足够认识。


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