荧光定量PCR方法的选择

　　荧光定量PCR方法的选择：

　　在我们做荧光定量PCR的时候，我们会遇到一个方法的选择，我们应该做多重体系还是单一体系，是用一步法还是用两步法，在这里我就此做一下介绍，欢迎高手批评指正：

　　一、多重体系VS单一体系

　　单一体系荧光定量PCR：在单一体系荧光定量PCR反应中，在一个反应管中只有一对引物，在每个反应中，也只有一个目的基因，也就和我们平时做的一般PCR一样

　　多重体系荧光定量PCR：在多重体系中，在一个反应管中加入两对或者更多的引物，每个扩增管中既有目的基因又有内参基因，例如利用FAM染料标记的探针检测目的基因，用VIC染料标记的探针检测内参基因。

　　注意了：SYBR Green 染料只能用单一体系，不能用多重体系，这是因为，染料法无法区分哪个是目的基因，哪个是内参基因，相反，探针法可以，这要对探针做不同的标记就可以了。

　　二、一步法还是两步法进行荧光定量PCR

　　在进行荧光定量PCR的时候，你可以用RNA反转录和荧光定量PCR在一步反应中进行，也可以用，RNA反转录和荧光定量PCR分开进行，他们分别称为一步法和两步法

　　1、一步法中，RNA反转录和荧光定量PCR在同一个反应体系中进行，这样比价方便，所有的反应在一个体系中进行，

　　2、两步法中，就是先把总的RNA反转录成CDNA，然后再用CDNA进行荧光定量PCR，这种方法在检测同一处理中不同的基因中非常实用，而且便于储存。