婴幼儿奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC-UV和HPLC-MS/MS法）

北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
:mM-q{[!s(Jj0针对婴幼儿奶粉中基质复杂的特点，本方法加大了净化材料的用量，以获得了更好的净化效果。采用天津博纳艾杰尔科技的新一代的Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管（500mg/15mL，货号：MS-SQA02）和Venusil® HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。分析测试百科网P.NEi7\l*ji9v
分析测试百科网9?u&E3j/X6{%{ CKb[
1 实验部分
!o;N9j[ v jf0
aq$C l$B01.1 仪器、试剂与材料
)F8dviDH0高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。
-H Zm ]X7KN0双氰胺标准品（CAS： 461-58-5；FW=84.08），新一代Cleanert^® MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil^® HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。

uN)tj/Pb.D01.2 实验步骤分析测试百科网-K$TF#T:v C
称取1g试样于50mL具塞离心管中，加2mL水，涡旋30s，加2ml乙腈涡旋30s。再往现有的提取液中加2mL乙腈，重复上述提取步骤。再将该提取步骤重复2次，得到共计约10mL的提取液。以4000r/min离心5min，将全部上清液加入新一代Cleanert® MAS-QuChERS管中（500mg/15mL），将MAS管上下晃动30s，然后涡旋30s后，8000r/min离心5min，取全部上清液（约10ml）于玻璃试管中，50℃下氮气吹干，加入1ml乙腈复溶，过0.22μm微孔滤膜，待测。
.i;c4F!I2`CN x0注：1.做基质加标实验时的标准溶液建议选择以水为溶剂，防止加标瞬间发生蛋白沉淀；
"f5N:Zl4t1`\02.乙腈提取分4次，为防止乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快，影响提取效果。分析测试百科网9V/b"?~e`2p
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1.3　实验条件分析测试百科网q%W}b$V/v;vJ:??
1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）：分析测试百科网(W4C0N/p5J9U9}2w,[
色谱柱：Venusil® HILIC（5μm，100Å，4.6*250mm）；
T.s~*j6^r1])zi0流动相： 10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=15: 85；分析测试百科网N3[1L@M8`!a?
波长：220nm；进样量：10µl；柱温：30℃；流速：0.8mL/min。
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{Yy3Me01.3.2 LC-MS/MS法：分析测试百科网]0N Y vn:fN|
（1）色谱条件：分析测试百科网1H0\l~D.^
色谱柱：Venusil® HILIC（ 5μm，100Å，2.1*150mm）；分析测试百科网1Fwp:` Z#pj,n3G
流动相：A：0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）
hr4we zG0B：乙腈；
.}}9[Bnxo.y(RM0进样量：10µL；柱温：30℃；流速：0.3 mL/min。

2.结果与讨论

2.1 高效液相色谱法：
Jf.P3I)FAc02.1.1双氰胺的液相色谱图

2.1.2实际样品基质加标的线性关系和检出限分析测试百科网 Ad8J q
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准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液；
vV&{g6Xr3j7~_0分别称取1g奶粉试样，添加一定量标准溶液，配制成含双氰胺为0.5µg/g，1µg/g，2µg/g，5.0µg/mL和10µg/g的添加样品，按照上述提取、净化方法操作，所得净化液按照上述色谱条件，依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表4：

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2.2 LC-MS/MS法
r'e.dr~#M)|%Qzp?02.2.1双氰胺的LC-MS/MS图分析测试百科网IAg!dLi-c0t{

'Km,CT}0S02.2.2实际样品基质加标的线性关系和检出限
J8x Nj-KZf"oC0准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，作为标准贮备液；
4B0w)Qp pD0分别称取1g奶粉试样，添加一定量标准溶液，配制成含双氰胺为5ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL和200ng/mL的添加样品，按照上述提取、净化方法操作，所得净化液按照上述液质条件，依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表6：

表6 双氰胺线性方程和定量限（LC-MS/MS法）

名称	保留时间	线性方程	相关系数	最低定量限（S/N=10）
双氰胺	2.25min	Y=3859.1X+23694	0.9900	2ng/g

2.2.3准确度和精密度
Yb3@2y+]3k9w8s;}0选取市售某婴幼儿奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液，双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化，故判断该方法无基质效应的影响。