微生物的分离、纯化

　　从混杂微生物群体中获得只含有某一种微生物的过程称为微生物分离与纯化。

　　1. 利用固体培养基分离

　　微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养，因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。

　　(1)稀释倾注平板法

　　先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释(如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 …)，然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可看出菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。

　　(2)涂布平板法

　　将含菌的样品加入还比较烫的琼脂培养基，再倒平板，易造成某些热敏感菌的死亡，某些好氧菌会在琼脂中间缺氧影响生长。

　　2. 用液体培养基分离纯培养

　　连续稀释，使一只试管里分配不到一个微生物。如果大多数平行稀释管里没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物就是纯培养物。