一、流式细胞仪检测的质量控制
1、样品与试剂
血液、骨髓、体液等必须当天采集,6
h之内进行免疫荧光染色;活化血小板检测应在采血后立即染色与固定。组织样品可采用机械法去聚集并过滤,最好用单细胞制备仪(medimachine)处理。试剂、缓冲液、溶血剂、固定剂等必须符合标准。
2、对照设置:目的是避免各种因素可能造成的假阳性或假阴性反应。
①同型对照:与单克隆抗体(MoAb)相同的、未免疫小鼠标记荧光素的免疫球蛋白亚类作对照。主要考虑细胞的自发荧光、非特异性抗体结合等影响因素。
②阳性对照:已知阳性标本能否确定为阳性。达不到要求时不能进行临床试验。
③阴性对照:用已知不表达某种抗原的细胞作样品检测,应出现阴性。目的是避免实验的非特异性反应。
④正常对照:对一种新的MoAb,在使用前进行对照试验,可保证仪器在最佳条件下获取样品。
⑤质控品:
试剂厂方提供与待测样品成分相近的稳定的质控物,并提供检测项目的靶值和质控范围,作为某一试验项目的全程质量检测物,评估试验结果的可靠性。如BDMulti-Check
Control 是淋巴细胞及其亚群分析的全血质控品。
3、仪器的校准与性能检测
使用标准荧光微球,运行FACSComp软件,校准通过,表明仪器状况良好。
二、流式细胞仪的功能和临床应用
流式细胞仪最大的贡献在于促进了免疫学基础研究和临床诊断。目前流式细胞术已被广泛用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、病理学、遗传学和临床检验等多学科领域的基础和临床研究。
三、辅助白血病和淋巴瘤分型和诊断
FCM是血液病MICC分型法中免疫表型分析的重要手段。免疫分型可为临床指导治疗,判断预后,预测复发提供帮助。
(1)白血病系列分化抗原:
T淋巴细胞白血病:CD3、CD5、CD7、CD10
B淋巴细胞白血病:CDl9、CD20、CD21、CD22,CDl0
NK细胞白血病:CDl6、CD56、CD57
粒细胞白血病:CDl3、CD33、MPO(髓过氧化酶)
单核细胞白血病:CDl4、CDl5、 CDl1b
红血病:血型糖蛋白A(glycophorinA),CDl3
巨核细胞白血病:CD41,CD42、CD61
(2)白血病系列非特异性抗原:CD34+、HLA-DR+、CD38-为干细胞、CD34+、HLA-DR+、CD38+为原始细胞,CD34-、HLA-DR-、CD38+为幼稚细胞。
白血病细胞系列确定后,可根据系列抗原表达特点选择单抗进一步分亚型。