高效液相色谱谱图的各种问题

　　液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

　　A、峰拖尾

　　原因 解决方法

　　1、筛板阻塞 1、a、反冲色谱柱

　　b、更换进口筛板

　　c、更换色谱柱

　　2、色谱柱塌陷 2、填充色谱柱

　　3、干扰峰 3、a、使用更长的色谱柱

　　b、改变流动相或更换色谱柱

　　4、流动相PH选择错误 4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

　　5、样品与填料表面的溶化点发生反应图 5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂

　　b、更改色谱柱

　　B、峰前延

　　原因 解决方法

　　1、柱温低 1、升高柱温

　　2、样品溶剂选择不恰当 2、使用流动相作为样品溶剂

　　3、样品过载 3、降低样品含量

　　4、色谱柱损坏 4、见A1、A2

　　C、峰分叉

　　原因 解决方法

　　1、保护柱或分析柱污染图

　　1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

　　2、样品溶剂不溶于流动相 2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

　　D、峰变形

　　原因 解决方法

　　1、样品过载 1、减少样品载量

　　E、早出的峰变形

　　原因 解决方法

　　1、样品溶剂选择不恰当 1、a、减少进样体积

　　b、运用低极性样品溶剂

　　F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

　　原因 解决方法

　　1、柱外效应 1、a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)

　　b、使用小体积的流通池

　　G、K’增加时，脱尾更严重

　　原因 解决方法

　　1、二级保留效应，反相模式 1、a、加入三乙胺(或碱性样品)

　　b、加入乙酸(或酸性样品)

　　c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)

　　d、更换一支柱子

　　2、二级保留效应，正相模式 2、a、加入三乙胺(或碱性样品)

　　b、加入乙酸(或酸性样品)

　　c、加入水(或多官能团化合物)

　　d、试用另一种方法

　　3、二级保留效应，离子对 3、加入三乙胺(或碱性样品)

　　H、酸性或碱性化合物的峰拖尾

　　原因 解决方法

　　1、缓冲不合适 1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液

　　b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

　　I、额外的峰

　　原因 解决方法

　　1、样品中有其他组份 1、正常

　　2、前一次进样的洗脱峰 2、a、增加运行时间或梯度斜率

　　b、提高流速

　　3、空位或鬼峰 3、a、检查流动相是否纯净

　　b、使用流动相作为样品溶剂

　　c、减少进样体积

　　J、保留时间波动

　　原因 解决方法

　　1、温控不当 1、调好柱温

　　2、流动相组分变化 2、防止变化(蒸发、反应等)

　　3、色谱柱没有平衡 3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱

　　K、保留时间不断变化

　　原因 解决方法

　　1、流速变化 1、重新设定流速

　　2、泵中有气泡 2、从泵中除去气泡

　　3、流动相选择不恰当 3、a、更换合适的流动相

　　b、选择合适的混合流动相