利用精确质量数据及MetWorks软件定性分析谷胱甘肽聚合物

Amber Kohl，Thermo Fisher Scientific，西棕榈滩，佛罗里达，美国

Heng-Keang Lim, 强生药理研究所，拉里坦，纽约，美国

Yingying Huang, Thermo Fisher Scientific，圣荷西，加利福尼亚，美国

引言：

在药物研发的初期，结合药物代谢物考虑药物的吸收、分布、代谢、排泄等方面的特性，可以是整个制药行业通过减少由于药代动力学方面的原因而造成的失败，从而提高药物研发的成功率。但是按照人体毒性实验要求，进行毒性预测是一件非常困难的事情，由于又要需要考虑临床前和临床药物的安全问题，常常存在药物流失现象。这一切都是由于任何一种动物实验模型能够充分预测药物在人体系统中心血管系统和肝脏系统的毒性情况。为了达到减少药物毒性，监测亲电反应活泼中间体已经成为药物设计一个分支，广泛应用于制药行业。

利用三重四极杆质谱扫描检测分子量为129道尔顿中性碎片丢失为检测和确认谷胱甘肽聚合物的重要方法。质量为129道尔顿的中性碎片为是由于从谷胱甘肽聚合物上脱除焦谷氨酸(pyrroglutamic acid)产生的。由于存在与焦谷氨酸无关的中性碎片丢失，而使该检测方法存在误测，缺乏选择性。该中性碎片检测的方法通过先捕获同等摩尔浓度比例的[13C2,14N-Gly] 谷胱甘肽、再通过同位素类型和检测中性焦谷氨酸碎片达到消除误测的目的。本文报道通过结合高分辨质谱数据中同位素类型分析，利用LTQ Orbitrap™质谱仪器分析研究人体肝微粒体系中10微摩尔的奈法唑酮。通过MetWorks软件同位素类型识别及过滤，从而达到选择性确认谷胱甘肽聚合物。结构确认工作也通过母离子和子离子的精确质量数来确定的化学分子式帮助实现确认。

关键词：LTQ Orbitrap™组合质谱仪、MetWorks代谢物确认软件、Surveyor Plus™液相色谱系统、精确质量数、谷胱甘肽聚合物、同位素检索、质量参数过滤

实验部分：

实验材料与实验方法

高效液相仪器设备： Surveyor Plus 型号高效液相系统 (Thermo Scientific)

质谱仪器系统

采用LTQ Qrbitrap组合质谱在喷雾电压为5kV正电子检测模式下检测，质谱进样的鞘气、辅助气以及反吹气分别为70、20和5个单位流速，通过温度为300摄氏度的离子传输通道进一步去溶剂化。在隔离宽度为2道尔顿，分别采用30%或者35%归一化能量进行多极质谱分析实验。对于含氯化合物的同位素多级质谱数据可以根据同位素精确质量数相差1.99705道尔顿和期望的同位素峰度比率为0.32进行判断。所有的质谱扫描实验数据均是通过内标校正模式下，通过等离子检测器检测，获得母离子和多级质谱分析中子离子的精确质量数数据。

结果与讨论：

结论：

本文报道利用LTQ Orbitrap组合质谱仪和 MetWorks软件确认人体肝微粒体系中谷胱甘肽聚合物的方法。该方法依靠同位素类型的参数设定使得能够选择性的分析研究数据中所感兴趣的代谢物。相比其他方法的事后处理数据，多重质量缺陷过滤方法可以同时对所感兴趣的已知和未知化合物进行确认。再进一步进行精确质量同位素检索，这两种方法的结合非常适合含有特定类型同位素元素谷胱甘肽聚合物的选择性确认。在一次高效液相色谱/多极质谱联用实验中，分析所得到的全扫描质谱图和多级质谱图，可以对分析物进行结构确认。采用本文讨论方法的其他例子以及更加深入的讨论可以参考参考文献。

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