针对糖蛋白微异质性评估的碳水化合物分析
碳水化合物标记和分析
使用 SCIEX CE * 进行快速、高分辨率 N-连接低聚糖分析，实现全面的聚糖表征
治疗性蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰，可以影响蛋白质的功能、间隙和稳定性。糖基化的变化受到抗体依赖性细胞毒性 (ADCC) 和补体依赖性细胞毒性 (CDC) 等免疫反应调节的影响。
由于治疗性蛋白质具有微异质性，需要一种能够解析大量此类聚糖种类的分析方法，以便快速、准确地鉴定它们。通过使用荧光团衍生作用策略，可以为聚糖提供带电和荧光特性，从而实现毛细管电泳分离和检测。SCIEX 提供标准聚糖分析技术以及新型快速方法。
新型快速方法
利用 PA 800 plus 制药分析系统，您可以在短短的 3 分钟时间内对最重要的 N-连接低聚糖进行分析。结合全新的快速 N-聚糖样品制备协议时，可以在 4 小时内获取样品数据。
使用毛细管电泳碳进行水化合物分析的主要优势包括：
- N-连接低聚糖定量分析
- 高分辨率分离方法能够区分关键聚糖种类，包括位置异构体。
- 针对常规用途环境开发的已验证方法
通过磁珠技术和 CE-LIF 对单克隆抗体 N-聚糖进行快速样品制备和分析
结果：
使用全新的样品制备协议（其中利用磁珠技术进行净化），N-连接低聚糖样品制备和工作流可在 4 个小时内完成。这种样品制备方式带来的好处是可以省略离心和/或真空离心步骤，并实现与 Beckman Coulter 的 Biomek 平台等全自动化流体处理系统的兼容。此外，这种方法包括无偏聚糖标记和动电进样，可以实现对高度甲烷硅基化碳水化合物的明确检测，否则，这些化合物可能会与过剩 APTS 染料发生共迁移。
全自动化样品制备结合对治疗性抗体的超快速 N-糖基化分析
标准方法：简化低聚糖分析
PA 800 Plus 碳水化合物标记和分析试验包含用于分析 N-连接低聚糖的试剂、缓冲液和分离毛细管。这些特性是对从糖蛋白中释放的低聚糖进行标记、分离和定量分析所必需的。释放（酶或化学物质）后，通过还原胺化反应使用 1-氨基-3, 6, 8-芘三磺酸 (APTS) 在聚糖的还原端进行标记。标记的化学计量学是每个聚糖上只会附加一个 APTS 分子。之后，高电荷和荧光低聚糖就可以在电场中轻松解析，并被激光诱导荧光检测到。经过激光诱导荧光检测器的 APTS 衍生聚糖会产生同等的检测器响应，从而可以直接比较相对数量。与蛋白质关联的低聚糖会生成一种指纹，可以使用此指纹鉴定或解读质量或功能。PA 800 Plus 提供了一种简便、耐用的蛋白质微异质性定量测定方法，通常可以在 15 分钟内完成分析。
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碳水化合物标记和分析包括：
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系统和化学特性：
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整合分离缓冲液修改能够改善共迁移种类的分离，从而强化试验的鉴定和定量分析能力。在上图中，使用这种优化的碳水化合物分离方法，可以解析多达 18 种不同的聚糖。
其他糖蛋白分析示例
核糖核酸酶 B 高甘露糖型
分离从牛核糖核酸酶 B 和各个标准结构中释放的 1-氨基芘-3, 6, 8-三磺酸标记高甘露糖型低聚糖。毛细管：50 cm（至检测器） x 50 um eCAP NCHO 涂层毛细管。缓冲液：25 mM 醋酸盐 (pH 4.75) 加上 0.4% 聚环氧乙烷。场强：500 V/cm；温度 20 °C；检测：激光诱导荧光（488 nm 激发，520 nm 发射）。
单糖分析
在对糖蛋白进行初始表征期间，单糖成分分析可以提供有价值信息。毛细管电泳方法的一个明确优势是试验的特异性。还原胺化作用和开口管形式使分析可以直接从糖蛋白水解物执行 - 不需要水解后净化。对于 LIF 和 APTS 衍生，每个糖都可以产生相同的检测器响应，如此一来，可以直接比较它们的相对数量。
使用醛缩酶处理后，对胎球蛋白弱酸水解产物 (A) 进行毛细管电泳分离。(B) 脱乙酰作用后的强酸水解产物和 (C) 单糖标准品。毛细管：27 cm x 25 um 裸熔融石英；缓冲液：240 mM 硼酸 (pH 9.0)；场强：740 Volts/cm；注射：0.5 psi，5；检测：激光诱导荧光（488 nm 激发，520 nm 发射）。
糖型分析
毛细管电泳的溶液型方法可以使操作人员轻松地创建一种直接从蛋白质评估蛋白质糖基化状态差异的环境。通过添加硼酸盐等盐类，可以形成放大糖类变体电荷状态的复合物。这是评估糖蛋白异质性最简单的方法。
*之前的 Beckman Coulter CE
