CHEF Mapper XA脉冲场电泳操作规程
一、开机
在等待凝胶凝固的期间,检查管路的连接状态,加入约2.2L的0.5X TBE缓冲液到电泳槽中。打开主机电源开关,然后打开旁边的蠕动泵开关,最后打开冷凝泵开关。
二、制冷
将蠕动泵流速调节到100,按冷凝泵上的 “Set temp”键将温度设定到14°,按“Actual temp”显示实际温度。
三、放置凝胶
1、将电泳凝胶的框架放入电泳槽中,白色螺丝固定到电泳槽的孔中。
2、将凝固好的凝胶从模具中卸下,连同黑色底板一起放到框架中。
3、确认液面完全超过胶面,确认挡胶条已经安装在电泳槽的下端。
四、电泳
1. 开机后,按“AUTO ALGORITHM”键。
2. 屏幕上显示“Molecular Weight: Low”,此时通过面板上的数字键和字母键输入你 所要分离的最小片段。比如:220kb,输入220,“K-BASES”,回车键;
3. 随后,屏幕上显示“Molecular Weight: High”,此时输入你所要分离的最大片段,比如2200kb,输入2200,“K-BASES”,回车键;
4. 屏幕上显示“Calibration Factor”,按回车键;
5. 屏幕上显示“0.5X TBE, 14℃, 1%PFC agarose,按回车键;
6. 此时屏幕上会显示如下参数:6V/cm,Run Time=**.**(hr),Included angel 120°,将Run Time改为18-19h,其他按回车即可;
7. 屏幕上显示:Int. Sw. Tm=**.**s, Fin Sw. Tm=**.**s, Ramping Foctor:a=[linear],按回车键。
8. 此时显示“A program is in memory”,按“START RUN”即开始运行。
五、清洗
1、电泳结束后,关闭冷凝泵并取出凝胶进行染色和成像,将放水管插入右侧的接口中,把缓冲液放到一个容器中。
2、加入2L的双蒸水,将蠕动泵调节到100,冲洗电泳槽15分钟后将水放出。
3、依次关掉蠕动泵和主机。将电泳槽内的水彻底放干,用吸水纸把剩余的水擦干,注意不要触碰到电极。