气相色谱/质谱法在微生物代谢组学中的应用

Koek MM, Muilwijk B, van der Werf MJ, Hankemeier T. Anal Chem. 2006 Feb 15; 78(4): 1272-81

摘要：建立了用于细菌代谢组学分析的方法，包括肟化和硅烷化衍生反应及后续的气相色谱与质谱联用分析。微生物基质中含有许多可能干扰衍生化或分析过程的化合物，如高浓度盐、复杂基质或缓冲液组分，或浓度很高的底物及产物。用不同微生物，如枯草杆菌、费氏丙酸杆菌和大肠杆菌对这一方法进行了广泛验证。本法能够分析许多类别的代谢物：醇类、醛类、氨基酸、胺类、脂肪酸、(含磷-) 有机酸、糖类、糖酸、(酰基-) 糖胺、糖磷酸盐、嘌呤、嘧啶和芳香化合物等。实验证明衍生反应有效(>50% 转化为衍生形式) 而且可重复(相对标准偏差<10%)。大多数代谢物的线性度令人满意，回归系数大于0.996。定量限为柱上40-500 pg，或微生物细胞(干重)0.1-0.7 mmol/g。一般情况下，细胞提取物代谢物分析的批内精密度(重复性) 和批间精密度(重现性) 分别优于10 和15%。尽管该方法并非靶向手段，并且微生物基质成分复杂，但大多数代谢物的分析结果均能满足生物分析中靶向分析的要求。通过分析不同生长期的大肠杆菌样品验证了该方法的适用性。