用LC/TOF-MS 对培养基和干无花果培养真菌的二级代谢物进行快速分析

Senyuva HZ, Gilbert J, Oztürko lu S.Anal Chim Acta. 2008 Jun 9; 617(1-2): 97-106. Epub 2008 Jan 16.

摘要:建立了液相色谱-飞行时间质谱(LC/TOF-MS) 分析真菌代谢谱的方法。通过向空白培养基中添加黄曲霉素、赭曲霉素、单端孢霉烯族毒素和其它代谢物,考察了方法的质量准确度、选择性(特异性)和重现性。经过提取和LC/TOFMS 分析后,用一个专门构建的含465 个二级代谢物的数据库对标准品进行了正确鉴定。用在各种培养基上生长7-14 天的11 种产毒真菌和4 种非产毒真菌验证了方法的可行性。还用本法检测了两种在 射线照射灭菌的干无花果中培养7-14 天的产毒真菌A.flavus (200-138) 和A.parasiticus (2999-465)。取附带部分培养基或干无花果的菌丝样品,用溶剂法提取,然后用快速分离微径LC 柱进行LC/TOF-MS 分析。数据用聚类分析进行处理,结果表明,用电喷雾(ESI)-TOF-MS 可以对粗提的代谢物进行明确鉴定。采用基础代谢物数据库,可以鉴定培养基分离液中的预期代谢物。方法快速而简便,可用于每日监测灭菌无花果中这些代谢物的浓度。在14 天当中,黄曲霉素和曲酸在5-6 天时达到最大值,而5-甲氧基柄曲霉素则保持相对恒定。除了预计产生的已知代谢物,还鉴定出了异烟棒曲霉素A、烟曲霉素、烟曲霉文B、畸形素(多肽)、曲霉酸、土曲菌酮、青地霉素和青霉酸。