轻松克服转染挑战 Neon电转染系统

【导语】新产品的推出往往代表了技术创新，让实验更简单易行，更高效可靠。Life Technologies公司推出了一种新一代的电穿孔仪——Neon™转染系统。它可将核酸（包括质粒DNA和siRNA）高效导入几乎任意一种动物细胞内，包括难以转染的原代细胞、干细胞和造血系统来源的细胞，同时保持高的细胞活性。

将质粒或小分子RNA转染进入哺乳动物细胞是研究基因功能的重要手段。目前市场上也有多种转染试剂可供选择，从聚合物、脂质体到这两年新兴的纳米颗粒。就普通的细胞系而言，这些试剂大多都能实现高效的转染。然而，有些细胞“百毒不侵”，比如干细胞或原代细胞，你还真拿它没办法。无论怎么优化，转染试剂就是不灵。这时，换个思路，试试电穿孔吧。

电穿孔技术出现于20世纪80年代中期。电穿孔是一个物理过程，在这个过程中，细胞在高电压场强的作用下，细胞膜发生暂时的重新排列，使得细胞膜具有临时的大分子可通透性，可从周围环境中摄人包括核酸、蛋白质、碳水化合物一类的大分子以及一些小分子。与其他方法相比，电穿孔技术具有简便、重复性好、效率高、适用范围广等优点。由于这是个物理过程，较少依赖细胞类型，后继的生物或化学副作用小，基本上各种细胞都能work；导入DNA，RNA或者siRNA统统没问题，而且对大多数细胞类型，用电穿孔法核酸的转移效率比化学方法高得多。当然，这种方法也有缺点，那就是毒性较大，电脉冲会杀死一定比例的细胞，因此，每次实验都需要一定量的细胞。

新产品的推出往往代表了技术创新，让实验更简单易行，更高效可靠。Life Technologies公司推出了一种新一代的电穿孔仪——Neon™转染系统。它可将核酸（包括质粒DNA和siRNA）高效导入几乎任意一种动物细胞内，包括难以转染的原代细胞、干细胞和造血系统来源的细胞，同时保持高的细胞活性。

这个开放而灵活的转染系统包括：Neon™转染仪、Neon™移液器架、Neon™移液器以及两套Neon™转染试剂盒。

新颖的转染室

大家可能注意到，Neon系统中没有带传统的电转杯。确实，这就是它的独特之处。Neon系统用一个特殊的移液器吸头取代了传统的电转杯。移液器吸头内使用24K镀金电极，可形成更为均匀的电场，同时最大限度地减少温度升高和pH值变化幅度，在确保细胞高效转染的同时，也更为温和，保证细胞存活率更高。

装有镀金电极的Neon移液器吸头（右）与普通电转杯（左）的比较。研究表明，与普通电转杯相比，狭长形移液器吸头可产生更为均匀的电场，从而提高细胞存活率和转染效率。

高效转染

实践证明，Neon系统能够对多种难以转染的细胞进行高效转染，包括原代星形胶质细胞、原代树突状细胞、Jurkat、小鼠胚胎干细胞等（表1）。多种细胞类型可获得超过75%的转染效率。截至目前，使用Neon转染系统发表的文献已超过百篇，覆盖了人、小鼠、大鼠等多种细胞。觉得摸索电转条件无从下手？别担心，在转染前，你只需登录Neon的网页（www.invitrogen.com/neon），就能找到细胞特异的实验条件，无需反复优化，轻轻松松提高转染效率和细胞活性。另外Life Tech还有一个专门供Neon客户分享他们的实验结果及经验的网站Neon Protocol Exchange（http://www.protocolexchange.com/index.jspa），在这里有很多成功案例，供你参考。你也可以与大家分享你的成功案例。

表1. 部分经Neon™ 转染系统成功转染的细胞系。

细胞系	细胞来源	转染效率* (%)	活细胞 (%)
原代星形胶质细胞	大鼠脑神经元	76	88
CHO	中国仓鼠卵巢	91	92
原代树突状细胞	人血	50	70
人神经干细胞	ES	53	97
Jurkat	人T细胞白血病细胞	94	97
KG	人血	76	83
原代MEF细胞	小鼠胚胎	80	75
小鼠胚胎干细胞	小鼠胚胎	88	96

* 转染效率是根据活细胞和死细胞的全部群体来计算的。

设计灵活

有时，细胞很珍贵，若每次转染所需的细胞量较少，那么你就能开展更多更复杂的实验。Neon系统带有两种吸头：10 μl和100 μl，让您可根据实验要求灵活选择，而不像传统电穿孔仪那样只能转染固定量的细胞。使用Neon系统，每次最少可转染2×104个细胞，最多可转染2×107个细胞。当然，这并非绝对。若你的细胞更少或更多，也可一试，据Life Tech的专家介绍，有一位客户曾成功转染了5000个原代毛囊细胞。

使用简单

由于省掉了电转杯，转染过程也更为简化：只需将细胞和核酸吸入Neon移液器吸头中，再插入到移液器吸头架上，并按“Start”即可。转染过后，直接将细胞加入培养容器中。既没有繁琐的移液，也不需要清洗电转杯。而且，通用的试剂盒适用于所有细胞类型，不用购买多个试剂盒，也无需鉴定最佳缓冲液。当然，一次性使用的24K金电极吸头成本不低。因多次使用会导致金包被变薄，改变吸头的电导率，所以每个吸头最多只能使用两次。

 
若您的实验室经常与难转染的细胞打交道，那真的不妨一试。害怕效果不好？那可以先申请DEMO演示啊。