关于Tundra 冷冻透射电镜的最常见问题的解答

作者：Lingbo Yu10.18.2021

2021 年初，我们推出了一种新的、更易于访问的冷冻电子显微镜解决方案：Thermo Scientific Tundra 冷冻透射电镜。

Jiri Novacek博士，CEITEC核心设施负责人，在布尔诺的赛默飞世尔科技使用新的Tundra冷冻透射电镜

这种体积小但功能强大的冷冻电镜仪器旨在为每个生物化学实验室提供单颗粒分析。但这意味着什么？

你问。我们回答了。

Tundra 冷冻透射电镜：常见问题和解答

Tundra Cryo-TEM最适合哪种类型的用户和设施？

Tundra 冷冻透射电镜是刚开始冷冻电镜的新用户的绝佳选择。这是由于引导式工作流程功能和简单的样品处理功能。对于正在寻找一种经济灵活的方法来扩展其冷冻电镜样品制备优化能力的有经验的用户来说，这也是一个有用的补充。

最后，即使是传统的室温显微镜学家也可以考虑使用 Tundra 冷冻透射电镜来丰富他们的服务组合。

Tundra Cryo-TEM 的尺寸是多少？

与其他冷冻电镜仪器不同，Tundra 冷冻透射电镜适合大多数标准尺寸的实验室，无需任何大量修改。

整个系统可以安装在一个 4 m X 4.2 m 的房间内，天花板高度至少为 2.74 m。

这包括显微镜、支持柜、样品装载站、HT 罐和工作站。

是什么让 Tundra Cryo-TEM 适合作为数据收集工具，而不仅仅是筛选工具？

Tundra Cryo-TEM 旨在以生物学相关分辨率进行 3D 重建，特别是使用单颗粒方法。

我们已经通过一些例子证明了这一点，3.4A 的 Gabaa 受体、20.3A 的 T0S 蛋白酶体、6.3A 的腺相关病毒 0 和 2.6A 的 apoferritin 作为基准蛋白。

这些惊人的结果是可能的，因为 Tundra Cryo-TEM：

1. 优化光学器件，实现 100kV 的高分辨率。

2. 具有CMOS检测器。它不仅具有更高的灵敏度，因此在 100kV 时具有良好的信噪比，使其适用于生命科学中对剂量极度敏感的样品，而且还节省了剂量分馏。剂量分割可以梳理出图像中的高分辨率信息，否则这些信息会因运动和辐射损伤而变得模糊。

3. 允许色谱柱中的样品通过持续 72 小时的扩展液氮杜瓦瓶冷却。这样可以进行长时间的数据收集。

下载我们的信息图 – 克服对冷冻电镜>>的误解

哪种相机最适合 Tundra Cryo-TEM 和 100 kV 应用？

我们的 Tundra 冷冻透射电镜配备了基于闪烁体的 CMOS 相机 Ceta-F。Ceta-F具有两大优点，使其成为市场上最适合100kV应用的探测器。

1. Ceta-F在100kV时具有非常好的检测量子效率（DQE）。传统上，基于闪烁体的相机在检测具有高加速电压（如200kV或300kV）的入射电子时信号较差，因为这些具有高能量的电子不会与闪烁体相互作用太多。然而，与 100kV 相比，2kV 的电子产生的信号是 200 倍。

2. Ceta-F在100kV时具有抗辐射性。直接电子探测器（DED）在产生信号方面非常出色，但同时也会受到辐射损伤。在100kV时，电子的损坏更为严重。由于上述类似原因，100kV的电子与传感器的相互作用更多，造成更大的损坏。Thermo Scientific Falcon、Gatan K3 和 DE-20 等广为人知的 DED 均未在 100kV 下经证实具有抗辐射性。

Tundra Cryo-TEM的数据采集通量是多少？

吞吐量为 250-300 张图像/小时。我们收集的数据集从 1,500 张图像（阿泊铁蛋白、阴性染色或其他一些短期筛选会话）到 5,000 张图像（对称蛋白质）到 10,000 张图像（不对称蛋白质）不等。

我们可以在 Tundra Cryo-TEM 上每个孔进行多次射击吗？

Tundra Cryo-TEM 有两个聚光镜和一个微型聚光镜。有两个聚光镜意味着照明区域与 C2 光圈成正比。

我们经常在 Tundra Cryo-TEM 上使用 50um 和 70um C2，这导致 1.25um 和 1.75um 的照明区域。使用网格类型 R1.2/1.3，Tundra Cryo-TEM 上只能进行一次射击。使用网格类型 R2/2，当收集到靠近箔孔边缘时，每个孔可以进行多次射击。我们在 R5/0 网格上用 2um C2 孔径每孔拍摄两次。

我们可以使用黄金网格进行数据收集吗？

是的，我们可以在 Tundra Cryo-TEM 上使用金网格收集数据。

然而，挑战在于自动无昏迷对准程序，这是在数据收集之前需要的。这不能在黄金网格上执行。

使用黄金网格时，正确计划很重要。首先，加载碳网格并将显微镜对准完美状态，然后加载金网格进行数据收集。

Tundra Cryo-TEM 一天可以筛选多少个网格？

Tundra Cryo-TEM 每天可筛选 10 个网格。加载一个样本需要 20 分钟，筛选一个网格需要 10 分钟，卸载还需要 <> 分钟。

筛选一个网格总共需要 40 分钟。

我需要多久烘烤一次进样器，需要多长时间？

在低温条件下工作时，冷冻装载站至少需要每天烘烤一次。有两种烘焙模式：

1. 原位烘烤，全自动，需要八个小时才能完成。这可以在显微镜运行过夜时使用。

2. 原位模式，用户需要手动清空液氮罐。这大约需要一个小时，可以在白天用于快速烘烤。

你在做演示，我可以给你发样品吗？

是的，我们正在做演示，并将容纳标准样品进行分析！

联系我们以了解更多信息并安排演示>>

观看 30 分钟的特别点播网络研讨会，详细了解我们的 Tundra Cryo-TEM >>

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Lingbo Yu 是赛默飞世尔科技的产品营销经理。

本文是在赛默飞世尔科技产品开发工程师 Dimple Karia 的支持下撰写的。