1、将滤膜编号,于105℃烘箱中烘干至恒重并称重为MG后,安装于过滤漏斗中,并安装至仪器相应位置处。
2、移取350 μL的热稳定淀粉酶溶液,溶于盛有50 mL的MES-TRIS缓冲液的酶瓶中;移取3.5 mL的10 mg/mL蛋白酶溶液,溶于盛有47 mL的MES-TRIS缓冲液的酶瓶中;移取700 μL的葡萄糖苷酶溶液,溶解于盛有50 mL的MES-TRIS缓冲液的酶瓶中,然后将酶瓶安装至仪器相应位置处。
3、将酶解袋装于仪器相应位置处。
精确称取混匀后的样品10~12 g(精确至0.1 mg)左右,记为MC。将称好的样品转移至滤纸筒中。将盛有样品的滤纸筒置于仪器萃取室内,向溶剂杯中加入沸程30~60℃的石油醚,仪器参数设置如下:
准确称取样品1.0 g(精确至0.1 mg),记为M,并转移置酶解袋中。设定酶解程序如下:
在葡萄糖苷酶酶解开始前,用3 mol/L的醋酸溶液调节酶解液PH(60℃下)至4.5±0.2(或可先添加5 mL的3 mol/L醋酸溶液后使用1 mol/L的氢氧化钠溶液调节至该PH值)。设置沉淀及洗涤参数如下:
抽滤完成后,将附有残渣的滤纸取出,放置于105℃烘箱中烘干至恒重并称重为MGR。
称样量及酶解的参数与与总膳食纤维测定方法相同,酶解结束后的洗涤参数设置如下:
抽滤完成后,将附有残渣的滤纸取出,放置于105℃烘箱中烘干至恒重并称重为MGR。将洗涤后的滤液收集在布氏漏斗下方的锥形瓶中,设置沉淀及洗涤参数如下:
沉淀完成后,在仪器上换装另一套装有恒重好的滤膜的漏斗及烧瓶,将沉淀好的溶液摇匀并倒入新的漏斗中抽滤。抽滤完成后,将附有残渣的滤纸取出,放置于105℃烘箱中烘干至恒重并称重为MGR。
每两份残渣按照国标GB 5009.5,一份计算蛋白质质量MP;另一份置于马弗炉中,于550℃下灰化3h测定灰分,计算灰分质量MA。