绿色+自动化丨破解鼠药命案，在线超临界流体技术出新招

导 读

溴敌隆等抗凝血类鼠药由于其毒鼠效力强、灭鼠效果好，被广泛用来灭鼠。近些年来，涉及该类鼠药中毒事（案）件屡有发生，给社会稳定和人民生命安全造成严重威胁。早期如2005年重庆某地村民带鼠药混入寿宴投毒，致31人中毒5人死亡；近期如2022年上半年，青海某地村民称家中多人出现尿血情况，经到医院检查是溴敌隆中毒，后被警方破获实为一起鼠药投毒案。

近期，浙江省公安司法鉴定中心采用在线超临界流体技术Online SFE-SFC-MS 系统建立了血液中8种鼠药的在线超临界流体提取检测方法，简化了血液样品的前处理过程，具有使用溶剂少、需要样品量少、绿色环保的特点，并实现了样品提取检测的全程自动化，相关成果发表在《中国法医学杂志》期刊上。

直击痛点：前处理方法创新

传统上，对血液中这类鼠药的检测一般采用蛋白沉淀法处理血样后，以LC-MS作为检测手段进行检测，该方法前处理及分析过程需要大量用到甲醇、乙腈等有机溶剂，且手动前处理容易带来人为误差，耗时耗力。

超临界流体色谱(SFC)是以超临界流体和少量改性剂为流动相的新型色谱分离技术。超临界流体具有低黏度、高扩散性和高溶解性等特点，使得SFC分析具有快速、高效、高分离等优势。将超临界流体作为萃取溶剂进行超临界流体萃取(SFE), 可以大大缩短萃取时间，并且与常规使用的溶剂萃取法相比，具有使用溶剂少、需要样品量少、绿色环保的特点。

图1. 岛津Nexera UC在线SFE-SFC-MS系统

实验流程：方法学验证可靠

将100 μL血液样品与5 g无水硫酸钠混匀，装入5 mL萃取罐中压紧，按照设定条件进行在线SFE萃取，萃取过程分为静态萃取和动态萃取，萃取物被自动引入色谱柱柱头进行捕集，而后按照设定的SFC-MS条件进行分析。样品处理简单快捷，萃取和分离分析过程均自动在线完成。

图2. SFE萃取过程

Ø 色谱图

溴敌隆等8种抗凝血类鼠药的MRM色谱图如图3所示，目标组分峰形良好，且溴鼠灵、氟鼠灵、鼠得克等手性化合物的异构体可以实现基线分离，可见，SFC较适宜用于手性物质分离，目前已有相关研究报道SFC正成为拆分对映异构体的首选。

图3. 8种鼠药的SFC-MS图

Ø 萃取效率

为考察SFE对各组分的萃取效率，通过重复对同一萃取罐内样品连续四次在线SFE-SFC-MS联用分析，以每次萃取所得的鼠药峰面积与四次萃取峰面积和的比值表示归一化萃取率。结果表明：前两次萃取的效率较高，各组分前两次的萃取率之和在73.02%~93.62%之间，基本可以满足实验要求。因此，后续实验时，SFE的萃取次数固定为两次。

表2. SFE的归一化萃取效率

方法优势明显，应用前景广阔

l Online SFE-SFC-MS 系统简化了血液样品的前处理过程，实现了样品提取检测的全程自动化，减轻了人力成本。

l SFE主要以超临界二氧化碳作为萃取剂，在处理生物样品时，无机盐等较少被提取，相比蛋白沉淀法处理的样品，对仪器的污染更少，产生的背景噪音更低。

l SFC-MS 采用超临界二氧化碳作为流动相，与需要使用甲醇、乙腈等有机溶剂作为流动相的LC-MS检测体系相比，其对环境更为友好且对手性物质存在分离优势。

结论

采用在线超临界流体技术Online SFE-SFC-MS 系统建立了血液中8种鼠药的在线超临界流体提取检测方法，简化了样品的前处理过程，实现了样品提取检测的全程自动化，且对环境更加友好。破解鼠药命案，在线超临界流体技术助力科技强侦，还原事实真相。

撰稿人：陈建立

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