血液的凝固机制是在血管受损时保证血压在封闭的血管系统中存在的重要的人体防御机制。在病理过程中炎症和动脉粥样硬化都与血栓形成有着密切的关联。这些对于心血管疾病的研究有着举足轻重的意义。在传统的血栓诱导实验中，通常的方法是在小鼠模型上使用FeCI3来诱导血栓的形成。这种方法无法直接in-vivo的观察与记录到血栓形成与消失的整个过程。为了解决这一方法学的问题Dr.Bruce Furie (Professor of Medicine at Harvard University and Chief of Hemostasis-Thrombosis at Beth Israel Deaconess Medical Center)在2000年开展了这方面的研究并与Intelligent Imaging Innovatio公司开展了关于此方法学应用的显微镜研发。2002年Dr.Bruce Furie的研究成果"Real-time in vivo imaging of plateletissue factor and fibrin during arterial thrombus formation in the mouse"被发表在著名期刊NatureMedicine（IF=29.886）上，并被引用了700余次，成为了近5000篇关于血栓形成和炎症中性粒细胞-血小板相互作基础。

文章中使用的VIVO Intravital显微成像系统包含一套正置荧光显微镜。标配的大型工作区域可安装多个机械手和为组织及动物成像准备的大型托盘。内置355nm或532nm脉冲激光器（>60μJ pulses at 200Hz），用以进行对显微图像中任意位点的血栓精确诱导。通过调节脉冲激光的强度可对不同尺寸的血管进行血栓诱导。该系统适用于各类血管床（dermis/skirflap, mesentery, cremaster, cerebral-microvessels (via cranial window)）以及较大的血管（femoral and carotidarteries）的荧光与明场成像。系统拥有包括明场在内的多个荧光通道同时成像功能，并在诱导与成像间无缝隙切换，使得用户可以观察到血栓在诱导前，诱导时与诱导后的整个产生与消失的过程。选配转盘共聚焦扫描头后，系统可被升级为转盘共聚焦显微镜，提供高速光学层切以及三维重构能力。整套系统由Slidebook软件驱动进行图像采集及后期的图像处理和数据分析。其内置的图像分析软件可实现对实验结果进行去三维重构，去卷积计算，模式识别，以及颗粒追踪与定位等功能。

    :ig. 2 Neutrophils and platelets in the inflamed cremasteric venules of a WT mouse, 3h after local injection of Cells are labeled beled by injection of low amounts of antibodies anti-Ly6G conjugated to DyLight649, anti-CD41 conjugated to PE and anti-CD62P conjugated to FITC.

    The movie shows the dynamic capture and release of platelets (red) by a crawling neutrophil (white), some of wh activated as indicated by the expression of CD62P (green).Courtesy of Dr. Vinatha Sreeramkumar & Dr. Andres Hid (Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares)

Fig.3 图像处理中Slidebook单颗粒追踪功能

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