EMnetik支持与常见问题解答

发布时间： 2022-02-01 15:09 来源：贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司

领域：	基因/基因组/测序
资料类型：	操作维修手册

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EMnetik 24 系统支持

EMnetik PCR 纯化参数范围

EMnetik PCR 纯化试剂盒支持 20 µL至 50 µL 的样品投入量和洗脱量。此范围之外的液量均可导致低得率。建议 EMnetik 24 微粒处理器的洗脱量设为 50 µL，仪器同样支持 20 µL 的低洗脱量；但请注意：洗脱量过低可能降低得率和纯度
浓度范围：800 ng/µL，片段尺寸可达 10 kb
尺寸范围：目前尚不支持 gDNA

EMnetik PCR 纯化常见问题解答

问：结合旋涡混合 —— 加入磁珠前，需要进行多少次移液混合？
答：必须将瓶涡旋振荡 30 秒，也可从试剂槽中等份移取磁珠缓冲液，混合至少 10 次或直至充分混匀。

问：可否使用未经推荐的试管/板？
答：我们已根据所推荐的试管/板对 EMnetik PCR 纯化处理器进行了优化。若使用其他耗材，可能仍需进一步优化。为获得最佳混合效果和 DNA 回收效果，试管/板应与管支架的底部完全贴合，这一点至关重要。

问：可否使用其他磁珠？
答：不可以。使用非支持磁珠将导致混合不均匀，显著降低得率。

问：EMnetik PCR 纯化磁珠试剂是否像 AMPureXP 和SPRISelect 试剂一样可进行尺寸筛选？
答：不推荐使用 EMnetik PCR 磁珠用作核酸的尺寸选择。

问：可否减少每份样品中的 EMnetik PCR 纯化试剂用量？
答：不可以。为实现最佳混合，EMnetik PCR 纯化试剂与样品体积比需为 1.8：1。

问：可否延长结合混合以及分离步骤的运行时间？
答：如果您想优化结合时间，可在用户界面选中并点击“结合混合及分离”步骤，以重复运行该步骤。DNA 浓度极高或极低时，此方法尤为适用。注意：重复运行结合混合及分离步骤时，需运行初始化&添加试剂步骤，以重启磁体。

问：可否在 TE 缓冲液中进行洗脱？
答：可以。TE 是一种可兼容的洗脱缓冲液。但已有示例表明，水中洗脱得率略高。

问：可否延长规定的洗脱时间？
答：如果您想优化洗脱时间，可在用户界面点击“洗脱混合及分离”图标，以重复该步骤。磁珠干燥过度时，此方法尤为适用。注意：重复洗脱混合及分离步骤时，需运行初始化&添加试剂步骤以重启磁体。

EMnetik PCR纯化故障排除

低得率：

可能的原因	可行解决方案及信息
PCR 纯化试剂未充分混匀	即便试剂看似已混匀，使用前也必须将磁珠试剂瓶内溶液充分混合 30 秒。使用试剂槽时，将充分混匀的磁珠试剂移入后，应立即使用。
磁珠损耗	吸取过程中的磁珠损耗：吸取时避免移液管吸头接触磁珠。如果磁珠被吸入移液管吸头，将移液管重新移回试管或孔中，并对准磁体释放吸出物，然后重新吸取。未充分清除而造成的磁珠损耗：吸取和废弃上清液之前，除了目测确认磁珠已聚集至管/孔壁，还需等待方案步骤显示“完成（Done）”字样。
乙醇浓度过低	乙醇具有吸湿性，浓度会随时间的推移而稀释。需每日即用即备浓度为 75% 的乙醇溶液，以获得实验的洗涤效果。
DNase 污染	确保隔离过程不会因 DNase 而造成污染。避免移液管吸头接触非无菌表面。
磁珠过度干燥	确保磁珠干燥时间不超过方案中规定的时间。
洗脱不充分	确保完全洗脱样品中的磁珠颗粒，确保孔壁/管壁无液滴残留。
使用未经推荐的管/板	未经推荐的管/板可能会因高出仪器太多而导致混合不充分。确保使用推荐的管/板。

纯度低：

可能的原因	可行解决方案及信息
乙醇浓度过高	乙醇洗涤浓度可降低至 70% 以提高纯度，但可能会造成得率降低。

乙醇残留：

可能的原因	可行解决方案及信息
乙醇清除不充分	使用 20µL 吸头或凝胶上样吸头吸除乙醇。清除管壁液滴。将液滴移至管底，以便将其吸除。将板从装置上取出并轻轻敲击（如有需要）。用吸头从孔底吸取残液。在进行乙醇干燥及洗脱步骤前，确保完全清除残留乙醇。确保充足的乙醇干燥时间。洗脱前，试管中应无可见的乙醇液滴残留。
乙醇混入磁珠微粒	将管从设备上取出，静置磁珠（30 秒）。之后，返回至磁体处并清除多余乙醇。返回至磁体处前，可对样品进行短暂的离心操作，以清除管壁上的磁珠。请注意：部分磁珠可能不会被磁体吸回。但如果在清除乙醇前小心将磁珠从乙醇中分离，加水洗脱时即可回收磁珠。若干燥时间过长；也可参见上述指导说明。
无法确定是否有乙醇残留	将板从设备上取出并检查；将板放回装置，磁珠再次团聚（10 秒），之后清除残留的乙醇。

EMnetik 质粒纯化常见问题解答

问：可否使用不同的样品量？
答：本方案已优化与 EMnetik 24 搭配使用的反应量。样品添加过多或过少均会影响样品与异丙醇的浓度比以及样品与磁珠的浓度比，同时还会由于混合不充分而降低异丙醇、磁珠浓度及试验得率。

问：洗脱液用量可否低于 50µL？
答：建议洗脱量为 50µL，但 EMnetik 24 微粒处理器支持低至 20µL 的洗脱量；请注意：用量过低可能降低得率和纯度。

问：可否提前同时加入磁珠和异丙醇？
答：在将磁珠和异丙醇转移至混合物前 30 分钟，可将两者混合；但混合 15 分钟后，可能造成效率和得率下降。

问：是否每个步骤都需要对磁珠进行混合？
答：是的，每次都需要。磁珠会很快团聚；未混匀磁珠会导致磁珠在反应中分布不均。内部测试表明，混合不充分将导致磁珠性能下降。

问：是否必须涡旋振荡 30 秒？
答：是的。想要获得最佳性能必须涡旋振荡 30 秒。将PLP 瓶涡旋振荡 10 秒而非 30 秒将导致...

问：可否使用其他磁珠？
答：不可以。采用不支持的磁珠将导致混合不均匀，得率也将显著降低。

问：可否减少每份样品中磁珠的用量？
答：不可以。磁珠缓冲液的用量需使异丙醇和磁珠达到精确比例，以实现最佳混合效果。
问：可否延长结合混合及分离运行步骤的时间？
答：如果您想优化结合时间，可在用户界面点击“结合混合及分离”图标，以重复运行该步骤。在 DNA 或大质粒浓度极高或极低的情况下，此方法尤为适用。请注意：重复运行结合混合&分离步骤时，需运行初始化及添加试剂步骤，以重启磁体。

问：若不慎加入部分絮凝剂，该如何处理？
答：结合步骤加入絮凝剂可能会导致质量下降或 gDNA 残留。若絮凝剂尚未完全沉淀，可适当延长裂解液离心时间。

问：冷冻后的团粒可否用于纯化？
答：冷冻于 -20°C 条件下的团粒可用于重悬。通常需要进行涡旋振荡，以完全破碎冷冻的团粒；或使团粒在重悬缓冲液中静置几分钟，使其软化。

问：制备裂解液时，使用单管而非板的试验性能是否得以优化？
答：是的。当未全部使用板操作时，可进行适当调整，以缩短耗时并优化性能：中和：将试管倒置 5 至 10 次，再进行离心分离（而非在摇床上混合 10 分钟）。离心分离：将离心时间缩短至 10 分钟，并将相对离心力提升至每分钟 10000 g以上。

EMnetik 质粒纯化故障排除

低得率：

可能的原因	可行解决方案和信息
磁珠未混匀	确保所有混合步骤中的磁珠均已充分混匀
异丙醇/磁珠浓度不当	确保磁珠充分混匀，然后再将其转移至孔中。再次确保磁珠和异丙醇用量比例计算正确，确保移液管吸头外部无磁珠液滴残留
细胞量不足	如果细胞团粒偏少或测定的细胞密度值偏低，则调整生长参数，以获得健康的培养物。确保细胞处于对数期时进行沉淀处理。抗生素添加量不可过多或过少。确保细胞在适当的培养基中生长。确保温育期内培养物搅拌充分且氧气供应充足。优化培养液用量。确保预培养物健康生长但不过度生长。确保离心步骤中所有细胞均已沉淀，且倾析期间沉淀物未被移出。沉淀后细胞进入衰亡期。衰亡期细胞可能会丢失质粒，导致得率降低。可使用生长曲线确定细胞何时进入衰亡期，并确保在细胞生长曲线期间进行细胞沉淀
磁珠干燥过度	大质粒会紧紧附着在磁珠上。避免在提取质粒时对磁珠进行过度干燥
混合不充分	Be sure beads are well mixed at all transfer steps.确保所有转移步骤中磁珠混合充分
磁珠损耗	待磁珠静置后再清除上清液。去除上清液以及乙醇洗涤液时避免吸出磁珠
耗材未放置在EMnetik 24 上	操作前确保全部耗材均正确放置于微处理系统中。如使用单管，确保已插入管架附件，试管放置妥当。耗材放置不当会导致结合或洗脱过程中混合不充分
乙醇浓度过低	确保使用即配的 70% 浓度乙醇。乙醇具有吸湿性，浓度会随时间推移而稀释。乙醇浓度降低可能导致得率下降
团粒破碎不充分	如果移液过程不足以破碎团粒，则将团粒在轨道摇床或水平摇床上涡旋振荡或混匀 30 秒

洗脱液中的 RNA

可能的原因	可行解决方案和信息
磁珠未混匀	确保所有混合步骤中的磁珠均已充分混匀
异丙醇/磁珠浓度不当	确保磁珠充分混匀，然后再将其转移至孔中。再次确保磁珠和异丙醇用量比例计算正确，确保移液管吸头外部无磁珠液滴残留。
细胞量不足	如果细胞团粒偏少或测定的细胞密度值偏低，则调整生长参数，以获得健康的培养物。确保细胞处于对数期时进行沉淀处理。抗生素添加量不可过多或过少。确保细胞在适当的培养基中生长。确保温育期内培养物搅拌充分且氧气供应充足。优化培养液用量。确保预培养物健康生长但不过度生长。确保离心步骤中所有细胞均已沉淀，且倾析期间沉淀物未被移出。沉淀后细胞进入衰亡期。衰亡期细胞可能会丢失质粒，导致得率降低。可使用生长曲线确定细胞何时进入衰亡期，并确保在细胞生长曲线期间进行细胞沉淀。
磁珠干燥过度	大质粒会紧紧附着在磁珠上。避免在提取质粒时对磁珠进行过度干燥。
混合不充分	确保所有转移步骤中磁珠混合充分。
磁珠损耗	待磁珠静置后再清除上清液。去除上清液以及乙醇洗涤液时避免吸出磁珠。
耗材未放置在EMnetik 24 上	操作前确保全部耗材均正确放置于微处理系统中。如使用单管，确保已插入管架附件，试管放置妥当。耗材放置不当会导致结合或洗脱过程中混合不充分。
乙醇浓度过低	确保使用即配的 70% 浓度乙醇。乙醇具有吸湿性，浓度会随时间推移而稀释。乙醇浓度降低可能导致得率下降。
团粒破碎不充分	如果移液过程不足以破碎团粒，则将团粒在轨道摇床或水平摇床上涡旋振荡或混匀 30 秒。

转移过程中吸收的荧光

可能的原因	可行解决方案和信息
磁珠未混匀	确保所有混合步骤中的磁珠均已充分混匀
异丙醇/磁珠浓度不当	确保磁珠充分混匀，然后再将其转移至孔中。再次确保磁珠和异丙醇用量比例计算正确，确保移液管吸头外部无磁珠液滴残留。
细胞量不足	如果细胞团粒偏少或测定的细胞密度值偏低，则调整生长参数，以获得健康的培养物。确保细胞处于对数期时进行沉淀处理。抗生素添加量不可过多或过少。确保细胞在适当的培养基中生长。确保温育期内培养物搅拌充分且氧气供应充足。优化培养液用量。确保预培养物健康生长但不过度生长。确保离心步骤中所有细胞均已沉淀，且倾析期间沉淀物未被移出。沉淀后细胞进入衰亡期。衰亡期细胞可能会丢失质粒，导致得率降低。可使用生长曲线确定细胞何时进入衰亡期，并确保在细胞生长曲线期间进行细胞沉淀。
磁珠干燥过度	大质粒会紧紧附着在磁珠上。避免在提取质粒时对磁珠进行过度干燥。
混合不充分	确保所有转移步骤中磁珠混合充分。
磁珠损耗	待磁珠静置后再清除上清液。去除上清液以及乙醇洗涤液时避免吸出磁珠。
耗材未放置在EMnetik 24 上	操作前确保全部耗材均正确放置于微处理系统中。如使用单管，确保已插入管架附件，试管放置妥当。耗材放置不当会导致结合或洗脱过程中混合不充分。
乙醇浓度过低	确保使用即配的 70% 浓度乙醇。乙醇具有吸湿性，浓度会随时间推移而稀释。乙醇浓度降低可能导致得率下降。
团粒破碎不充分	如果移液过程不足以破碎团粒，则将团粒在轨道摇床或水平摇床上涡旋振荡或混匀 30 秒。

乙醇残留

可能的原因	可行解决方案和信息
乙醇清除不充分	使用 20µL 吸头或凝胶上样吸头吸除乙醇。清除管壁液滴。将液滴移至管底，以便将其吸除。将板从装置上取出并轻轻敲击（如有需要）。用吸头从孔底吸取残液。在进行乙醇干燥及洗脱步骤前，确保完全清除残留乙醇。确保充足的乙醇干燥时间。洗脱前，试管中应无可见的乙醇液滴残留
乙醇混入磁珠微粒	将管从设备上取出，静置磁珠（30 秒）。之后，返回至磁体处并清除多余乙醇。返回至磁体处前，可对样品进行短暂的离心操作，以清除管壁上的磁珠。请注意：部分磁珠可能不会被磁体吸回。但如果在清除乙醇前小心将磁珠从乙醇中分离，加水洗脱时即可回收磁珠。若干燥时间过长；也可参见上述指导说明。
无法确定是否有乙醇残留	Remove from the device and examine; return the plate to device and allow the beads to pellet again (10 seconds) before removing additional ethanol.将板从设备上取出并检查；将板放回装置，磁珠再次团聚（10 秒），之后清除残留的乙醇。

Not intended or validated for use in the diagnosis of disease or other conditions.