iTRAQ实验技术服务

蛋白质组定量分析

Quantitative analysis of proteomics

定量蛋白质组学是一种用来检测样品中蛋白相对/绝对含量的分析化学技术，而质谱则是实现该技术依赖的一个重要手段。基于质谱的蛋白质组学主要分为两大类，即标记定量和非标记定量。其中，标记定量常用的是iTRAQ和TMT两种试剂盒，其均是利用质谱检测报告离子的信号相应强度来对蛋白进行相对定量的。而非标记定量的原理则是对被检测到的离子峰强度进行积分，以积分面积进行相对定量的。近几年备受关注的数据非依赖采集（Data Independent Acquisition）方式则是传统非标记定量的升级版，能够扫描到更全面地碎片信息，不会造成低丰度蛋白的丢失。

产品介绍

• iTRAQ同位素标记定量技术 

  iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是由美国应用生物系统公司AB研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量。

实验原理 

iTRAQ^TM试剂在结构上包括3个化学基团，分别是报告基团、平衡基团和反应基团。（如下图1）

图1：4plex iTRAQ分子结构。

不同样品的同一肽段经iTRAQ试剂标记后具有相同的质量数，并在一级质谱检测（MS¹）中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后，在二级质谱检测（MS²）中，不同的报告基团被释放，它们各自的质谱峰的信号强弱，代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。

iTRAQ技术的特点

1、通量高

2、重复性好

3、灵敏度高

4、定量准确

5、数据丰富

6、自动化程度高

鹿明优势

1、蛋白提取、浓度测定、蛋白酶切一站式服务

2、强大的项目团队：鹿明生物拥有研究员、博士、高级外聘专家等数名

3、技术成熟：近10年的组学技术服务经验，拥有完善的样品处理体系

4、先进的仪器设备

应用领域 

疾病标志物筛选            植物抗逆研究

发病机理研究              药物靶点研究

特殊功能蛋白质筛选        作用机制研究

植物品种改良              工程菌改造

实验流程

注：以iTRAQ 8标为例

样本类型及含量要求

送样要求

仪器设备

Thermo Q-Exactive高分辨质谱 

Sciex Triple TOF 6600质谱仪

服务流程

小鹿智囊

① iTRAQ / TMT 定量蛋白质组和双向电泳技术相比，有什么优势？

双向电泳技术是伴随着 MALDI-TOF 技术发展起来的蛋白质分离技术，理论上可以通过等电点（IEF）和分子量（SDS-PAGE）的差异将总蛋白质逐一分开。但实际情况并不理想，因为低丰度蛋白无法染色成功而看不见，蛋白翻译后修饰后偏离理论位置等等，一张 2-D胶能鉴定到的蛋白质总数最多 1000 - 2000 蛋白。

相较于2-D以及 DIGE 等基于电泳的技术，iTRAQ / TMT 分辨率高，鹿明生物进行的细胞样品最多有发现超过 6000 个蛋白，并且绝大多数蛋白都有定量和定性信息；其次 iTRAQ/TMT 通量高，可以一次最多完成 8 或10个不同处理组的实验，特别适合于多组样品间的同时比较以及生物学过程的动态检测。

② iTRAQ / TMT 实验的主要步骤有哪些，主要采用哪些仪器，检索的软件及常用数据库有哪些？

实验步骤包括：蛋白提取、浓度测定及 SDS-PAGE 凝胶检测，质检报告；蛋白酶解、标记；一维色谱分离，冻干机冻干；高分辨 LC-MS/MS 质谱检测；搜库定性、定量分析；差异蛋白筛选，差异蛋白生物信息学分析；完整报告整理。

目前鹿明生物的质谱仪器有：Sciex公司 6600 Triple TOF、Thermo 公司Q Exactive、Fusion质谱仪。

常用的检索软件有：SCIEX公司ProteinPilot 5.0、Thermo 公司Proteome Discoverer。

常用的数据库有：Uniprot数据库、NCBI数据库、本地自建数据库。

③iTRAQ、TMT、Label free 实验用的是什么质谱仪，其定量是基于一级质谱还是二级质谱？

iTRAQ、TMT、Label free都属于蛋白组学实验，前二者是属于同位素标记定量蛋白组二者的原理都一样；第三个是非标记定量蛋白组。 三者所用的仪器都差不多，主要有：Sciex公司 5600 Triple TOF、Thermo 公司Q Exactive； PS: TMT 10标蛋白组只能用thermo公司Q Exactive，不能用AB 5600 做。 Itraq、TMT是基于二级质谱定量，Label free是基于一级质谱定量。

iTRAQ蛋白质组学：iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是由美国应用生物系统公司AB研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量。

蛋白质组学：v从表层原因层面探究和解决生物学问题.

一、服务须知                                                     
1.技术服务内容
本公司只提供组学技术服务。页面展示价格为市面上同类商品的参考价格，服务价格下单前请致电咨询

2.服务项目
蛋白组学，代谢组学，脂质组学，多层组学；本公司专注于多层组学定制服务；

二、公司简介                                                        

上海鹿明生物科技有限公司（前身：成立于2009年的上海博苑生物科技有限公司），一直专注于生命科学和生命技术领域，是国内早期开展以蛋白组和代谢组为基础的多层组学整合实验与分析的团队。经过近10年的发展沉淀，公司建立起了 Labelfree、iTRAQ/TMT、DIA、PRM、修饰蛋白组等蛋白组学技术平台和全谱代谢组、靶向代谢组、拟靶向代谢组、脂质组等代谢组学技术平台以及相应的数据整合分析平台，并建立了科学完整的服务流程和精细规范的操作标准。

三、业务介绍                                                      

四、仪器介绍                                                        


五、研究方向                                                         

生物领域各个研究方面，如：

▶ 农林领域：抗逆胁迫机制，生长发育机制，育种保护研究等；

▶ 畜牧业：肉类及乳品质研究，致病机理研究等；

▶ 基础医学、临床诊断：生物标志物，疾病机理机制，疾病分型，个性化治疗等；

▶ 生物医药：药物作用机理，药效评价，药物开发等；

▶ 微生物领域：致病机理，耐药机制，病原体-宿主相互作用研究等；

▶ 海洋水产：渔业资源，海水养殖，渔业环境与水产品安全等；

▶ 生物能源、环境科学领域：发酵过程优化，生物燃料生产，环境危定风险评估研究等；

▶ 食品营养：食品储藏及加工条件优化，食品组分及品质鉴定，功能性食品开发，食品安全监检测等。

六、合作流程                                                         

iTRAQ实验技术服务信息由上海鹿明生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于iTRAQ实验技术服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途