如何用显微镜拍出良好清晰度的细胞图片

显微镜是生物实验室中必备的设备，但显微镜的类型和配置众多，需求和配置如何相互对应？又该如何去选择适合自己实验室的显微镜？让我们跟随深蓝云一起，看看显微拍摄的设备需求吧。
 

问题1:我经常需要观察细胞，应该用什么样的显微镜？
 

回答：细胞种类众多，但是大多数活细胞观察时都是未染色细胞。未染色的细胞为透明状态，普通明场显微镜观察不到，这种情况下，需要使用相差的观察方式。相差模式将光波通过细胞折射率和厚度不同的各部细微结构产生的相位变化变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本。
 

问题2：我们课题组即需要对病理切片进行观察，也需要对培养的细胞进行观察，这两种方式需要什么样的设备？
 

回答：切片类型的样本建议采用正置观察方式，即物镜位于载物台上部，而细胞一般放置于培养瓶、培养皿中，所需要的空间更大，更适合使用倒置观察方式。因此对常规显微镜就需要一台正置显微镜、一台倒置显微镜。不过ECHO正倒置一体显微镜，既可以正置也可以倒置，一台就可以满足两种需求啦。
 

问题3：既需要明场拍摄也需要荧光拍摄需要怎么选？
 

回答：

▲荧光产生原理图

▲ 荧光光路示意图
 

单色相机拥有更高的灵敏度以及光通量，而彩色相机拥有更好的对比度和色彩还原能力。荧光观察时需要用特定波长的激发光激发材料产生荧光，并通过滤色片最终得到特定波长的荧光，而这种荧光一般较弱，观察时需要高灵敏度的相机，因此配置采用单色相机。单色相机无法识别真实颜色，不适合进行明场拍摄，因为明场拍摄需要更好的对比度，彩色相机才可以满足此需求。如果想获得最好的荧光与明场观察效果，最佳的选择是搭配双相机系统。
 

这里说一下哦，ECHO正倒置一体显微镜突破了常规显微镜的设计，同时配置了双相机系统，自动切换，保证无论明场还是荧光都可以获得最佳的观察效果，同时满足您的多种需求。
 

问题4：市面上荧光显微镜的光源多种多样，我该选择哪种？

回答：大多数荧光显微镜的光源波长需求都在可见光范围内，在这个范围内，LED光源要明显优于其他光源，其在不同波长范围可以做到光强一致，且寿命更长，无需预热和冷却，作为冷光源，其可以做到随开随用，且光毒性低，适合大多数实验室配置。
 

问题5：可供选择的荧光通道那么多，我该如何选择荧光通道？

回答：对于荧光通道的选择，需要根据用户想要观察的荧光波长来进行确定，如用户后续需要DAPI染色，需要进行GFP蛋白的观察，这些观察都有其对应的荧光波长范围，符合该波长范围的荧光通道就可以选择，如DAPI通道，FITC通道。
 

问题6：物镜该如何选择？荧光观察配置什么物镜？

回答：

▲ 物镜

物镜的分类方式很多，这里先说一个根据色差校正进行的分类，色差校正能力由高到低分别是复消色差显微镜，半复消色差显微镜（萤石物镜），消色差物镜，消色差能力越强，带来的最直观提升是NA值越高，因此分辨率更好。半复消色差物镜的校正范围为400-500，是常见荧光发射光的波段，适合进行荧光观察，因此对于荧光显微镜，一般配置半复消色差物镜。

以上是一些关于如何选择和配置显微镜的常见问题，后续我们还会更新一些更加深入的信息。

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