应用分享 | 还在担心重复性？看看微滴数字 PCR 在国际多中心测评中的表现吧

根据《Analytical Chemistry》发表的一项研究表明，微滴数字 PCR 在 21 个独立的国际实验室之间针对稀有的单核苷酸突变具有高度的检测重复性。本次研究是首次针对微滴数字 PCR 的重复性和可操作性的一次室间评估，也可以作为将来其他方法学评估的基础和框架。

为此，研究人员选择了 KRAS 点突变作为检测对象，这突变位点是最具挑战的肿瘤生物标志物之一，由于突变丰度低，用常规的 qPCR 与 NGS 的方法无法有效的检测。因其与结直肠癌与非小细胞肺癌的不良预后相关，而在液体活检的转化研究中备受关注。

本次的国际性微滴数字 PCR 的室间质评是由英国 LGC 公司协调（LGC：英国政府化学家实验室），盲测的所有样本、试剂以及特定耗材由该公司寄送。要求在北美和欧洲的 21 个实验室的研究人员在存在过量野生型 DNA 的情况下，使用微滴数字 PCR 来定量具有单核苷酸突变位点 KRA SG12D 的拷贝数浓度和丰度（低至〜0.17％ 等位基因频率）。实验室使用 Bio-Rad 的 Droplet Digital^TM PCR（ddPCR^TM）技术在 Bio-Rad 的 QX100^TM 或 QX200^TM 微滴数字 PCR 系统上进行了实验。微滴数字 PCR 是 Bio-Rad 的专有方法，通过将样本随机分装至 20 000 个油包水液滴中，通过 PCR 反应后，终点检测每个微滴的荧光信号。

所有 21 个实验室的结果在严格界定的误差范围内相互一致。虽然三个实验室最初报告不同的结果，但进一步的分析显示是由阳性微滴与阴性微滴阈值划分的错误导致，而不是测量误差。当根据推荐的指导原则重新分析数据时，他们产生的结果与其他 18 个实验室一致，验证了微滴数字 PCR 结果的高度重复性与稳定性。

微滴数字 PCR 的可能性

该研究提供了一种更新、更强大的核酸分析平台，以解决目前实际检测中其他基于 PCR 平台所面临的重复性的困扰。

LGC 的首席科学家 Jim Huggett 表示：「短期来看，我将会越来越多地将微滴数字 PCR 用作改善实验室协调性的参考方法」。他还表示：「随着微滴数字 PCR 越来越多地进入到医学研究，人们会发现他们将更容易获得可比较的结果。」
 

Jim Huggett，LGC 首席科学家。

更多关于 Bio-Rad 微滴数字 PCR 的信息，您可访问网站：http://www.bio-rad.com/，或者关注我们的公众号：伯乐生命科学。

参考资料：

1.http://www.bio-rad.com/en-us/life-science-research/news/digital-pcr-shows-high-reproducibility-in-international-multicenter-study

2. Anal Chem. 2017 Feb 7;89(3):1724-1733. doi: 10.1021/acs.analchem.6b03980. Epub 2017 Jan 18.

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