21 色流式方案全面检测人外周血和髓样淋巴细胞亚群免疫表型

OMIP 是 Optimized Multicolor Immunofluorescence Panel 的缩写，是由 Cytometer Part A 开创的一个全新的版面，旨在沟通和传播复杂流式方案及细胞功能相关研究。虽然方案开发在最终的生物研究出版物发布受到限制，但是实际上设计并优化这些方案非常复杂，费时费力，所以传播这些方案非常有价值。OMIP 将仅占用两页印刷页面，但会提供大量的详细的补充信息，可以大大缩短学习者的探索时间，推动流式发展。

本文的工作得到了美国国立卫生研究院和美国国家癌症研究所的支持，阐明了基于 Bio-Rad ZE5 高端流式细胞仪产生的 21 色流式方案，使用了 NIH 人类免疫学项目中描述的主要表型，并具有深层 T 细胞分析的标记。该方案只需要 1*10⁶ 个外周血单个核细胞，可同时测定人外周血中单核细胞，嗜碱性粒细胞，粒细胞，树突状细胞，自然杀伤细胞，B 细胞和所有明确定义的 T 和 T 辅助细胞亚群。特别设计的该方案还用于治疗异基因造血干细胞移植（alloHSCT）后移植物抗宿主病（GVHD）的新药临床试验。一管样本完成多种细胞分析，不需要破膜固定步骤。接下去就让我们来看一下它是怎么诞生的吧？

1、先来了解一下 ZE5 强大的配置吧~~
 



2、根据仪器配置产生的完美方案是什么样的呢？
 



3、设门策略，这个信息含量极大，得仔细想想，仔细看看——
 


5、抗体克隆号信息及精准滴度，这么详细的信息太有用啦
 


6、连补偿值都有参考了，虽然 21 色但整体补偿值很小，简直是太棒了~~
 


7、最后我们来看一下完美的结果吧~~




综上，作者开发了一个标准化的多色方案来检测所有主要的人淋巴样和骨髓样细胞群与深度 T 细胞表型分析，从而降低实验的变异性和冗余度，也减少了对样本的需求。这个方案精妙之处是使用全部是表面抗原，避免了固定和破膜步骤，节约样本制备的时间和成本。作者还使用了高维分析与 t 随机邻居嵌入（tSNE）根据趋化因子和 Fc 受体揭示了正常人 PBMC 的差异。同时这种多色流式方案允许高维数据可视化技术来揭示正常或疾病状态下的未知或定义不明的细胞类型。

值得注意的是，作者还提到了 ZE5 与 CyTOF 相比，虽然 CyTOF 可以同时进行检测 20-40 个抗原，但是基于 ZE5 产生的方案对样本量的需求更少，获取样本数据更快，检测成本更低，同时所得数据可以进行高维分析。
 

文章来源：
1. Karl W. Staser, William Eades, Jaebok Choi,Darja Karpova, John F. DiPersio. OMIP-042: 21-Color Flow Cytometry to Comprehensively Immunophenotype Major Lymphocyte and Myeloid Subsets in Human Peripheral Blood.  Cytometry Part A  00A: 00-00, 2017
2. Karl W. Staser, William Eades, Jaebok Choi,Darja Karpova, John F. DiPersio.  OMIP-042: 21-color panel to immunophenotype major lymphocyte and myeloid subsets in human peripheral blood.  ONLINE MATERIAL

文中产品仅供研究使用，不用于诊断。