Stain-Free免染Western实验流程

Bio-Rad Stain-Free 免染Western实验流程是获得更好WB结果的简单方案。Stain-Free 技术提高了实验速度并能够在实验的每一步进行质量评估：从凝胶电泳到蛋白定量。该流程无需额外染色、脱色步骤即可进行总蛋白标准化 (Total Protein Normalization, TPN) 定量，同时使研究人员能够更快地获得WB结果和精准的定量数据。

Stain-Free 优于传统的WB实验流程，因为它允许用户：

• 电泳几分钟后可视化凝胶蛋白条带；

• 在每个实验步骤执行质量评估，无需染色和脱色；

• 通过总蛋白归一化提高准确性并产生可靠的定量结果；

  Stain-Free免染Western实验流程  



使用 Stain-Free 作为总蛋白内参的优势：

1. 比单一管家蛋白表达更稳定，更合适的内参蛋白；

2. 内参动态范围更宽，信号不易饱和，更准确反映上样量差异；

3. 数据重复性高，定量更准确；

总蛋白归一化定量

Bio-Rad 的 Stain-Free 免染Western流程提供了实用、方便且可靠的方法来实现总蛋白内参归一化。在凝胶电泳结束后，仅需 1 分钟激发后，就可在凝胶中观察到 Stain-Free 标记的总蛋白信号，并通过成像系统记录总蛋白信号。该技术使研究人员可以轻松地对蛋白质印迹进行总蛋白上样控制。在Western实验结束后，目标蛋白条带也被成像系统记录，软件可自动执行总蛋白的内参归一化定量计算，最终确认各泳道对应目标蛋白的真实表达差异。



Image Lab 软件中使用 Stain-Free 成像仪的总蛋白归一化功能。


为什么 Stain-Free 总蛋白定量优于其他总蛋白染色方法？

传统的总蛋白染色剂（如考染）会阻碍蛋白质印迹的下游转印步骤，操作很不方便，这是阻碍总蛋白定量被广泛应用的障碍之一。Stain-Free 免染技术的独特兼容性使总蛋白成像成为WB定量的更好方法：免染成像后的凝胶可继续进行转印实验、抗体杂交及成像操作，不影响WB后续实验。


 Stain-Free 总蛋白在更宽的动态范围内提供定量线性响应：



10–50 μg HeLa 细胞裂解液中三种管家蛋白的免染色总蛋白信号与化学发光信号的线性比较。 (A)免染总蛋白；(B、C、D)β-actin等三种管家蛋白；(E)免染总蛋白、三种管家蛋白的线性比较。尽管actin与tubulin信号呈线性，但光密度远低于实际加载的预测“定量响应”，而免染总蛋白信号与预期结果高度一致。

参考文献：Taylor SC Posch A (2014). The design of a quantitative western blot experiment. Biomed Res Int. 36, 1590