Eppendorf 应用文献_超离纯化人源脂肪干细胞外泌体

细胞会在细胞外环境中释放不同类型的膜源性囊泡。这些膜源性囊泡被称为胞外囊泡（EV），包括外泌体和微泡体。外泌体是相对较小的胞外囊泡（30-150nm），可在细胞之间转移核酸、蛋白质、酶和脂质等生物大分子，是细胞间通讯的重要模式。此外，它们可以用作各种疾病的生物标志物，也可以作为下一代治疗剂的天然药物递送载体系统。

在本文中，我们描述了一种通过结合高速和超速离心机从脂肪源性干细胞中快速、简单地分离外泌体的方法。细胞在BioBLU® 0.3c 一次性生物反应罐中培养，并由 DASbox®迷你生物反应器系统控制。DASbox 迷你生物反应器系统可以培养大量干细胞，从而获得高产量的外泌体。随后，我们使用 CR22N 离心机对条件培养基进行了清除。这是一台高速离心机，RCF 高达 32,300 x g。在本文，我们使用了可同时容纳 10 x 50 mL 和 10 x 15 mL 锥底管的 R15A 固定角转。为了进一步浓缩外泌体，我们使用了最大 RCF 为803,000 x g 的 CP100NX 超速离心机以及能够容纳6 x 40 mL 离心管的 P32ST 水平转子。此外，相比于不使用蔗糖垫液的对照组，通过在超速离心步骤中使用蔗糖垫液，可以快速分离出纯净均一的外泌体。在整个离心过程中，我们都使用了大容量转子，从而减少了重复的离心步骤，并将外泌体分离时间缩短到 4 小时以内，快于沉淀或过滤等其他分离方法。