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杨艳 金燕
在动物的生产过程中，往往会使用兽药来进行疾病治疗和提高生产性能，随之而来的是问题是兽药残留在动物源性食品（如牛奶、肉类、蛋等）中广泛存在，给人民带来健康风险。2020年4月1日，中国开始实施GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》，替代了2002年发布的农业部公告第235号《动物性食品中兽药最高残留限量》相关部分。
尽管有国家标准出台，仍然有些动物源性食品存在兽药残留不符合食品安全国家标准规定。随着国民生活水平提高，作为动物源性食品的牛奶已经走进家家户户，成为日常膳食的一部分。若长期食用兽药残留超标的牛奶，会危害人类健康。
本方案参考国家标准GB 29696-2013《食品安全国家标准 牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定 高效液相色谱法》对牛奶中四种阿维菌素类单个或多个药物（伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和埃普利诺菌素）在Ultimate 3000液相色谱仪上同时进行测定，且检测限低于标准方法，线性范围和回收率等均满足国标要求。分析结果如下：
图1 四种阿维菌素类药物标准品谱图
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表1 重复性实验数据
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表2 标准曲线方程
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本解决方案依据国标测定牛奶中阿维菌素类药物残留，四种阿维菌素的最低检测限为0.0002 mg/L，远低于标准要求（0.001 mg/kg）；在0.0005-0.5 mg/L的浓度范围内，线性相关系数均为0.9999；连续进样7针，保留时间和峰面积的RSD均小于0.8%，结果重现性非常好。
牛奶中喹诺酮类药物残留的检测标准为GB 29692 – 2013《食品安全国家标准 牛奶中喹诺酮类药物多残留的测定 高效液相色谱法》 ，标准适用于牛奶中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星单个或多个药物残留量检测。该方法前处理：牛奶样品用乙腈提取，然后取上清液，用正己烷进行分配；残渣也用乙腈重复提取一次，上清液用同一份正己烷进行分配，合并两次提取液在50℃下旋转蒸发至仅剩余不易蒸干的黄色油滴，用1 mL流动相溶解，过滤膜待上机。该方法难点是前处理比较繁琐，需两步液液提取及浓缩，耗时耗力。
赛默飞关于牛奶中喹诺酮类药物残留的解决方案：利用赛默飞特有的含有双流路的UltiMate 3000双三元液相色谱系统，一个流路进行样品的在线纯化，另一个流路进行样品的分离分析，无需复杂的前处理过程。与离线的样品处理方法比较，在线方法具有自动化程度高，准确度和重现性较好，且溶剂消耗少，样品分析效率高等优点。
因为牛奶样品含有大分子基质蛋白质等，所以本方案的在线纯化柱选用了TurboFlow HTLC Cyclone。涡流色谱技术（Turbulent flow chromatography，TFC）是利用大粒径填料使流动相在高流速下产生涡流状态，大分子的基质成分如蛋白质等，还未能扩散进入填料颗粒内部就已被洗出柱外，而小分子的待测物则可以保留下来，与基质分离，从而对生物样品进行净化与富集。
图2 UltiMate 3000双三元测喹诺酮类药物的连接流图（点击查看大图）
色谱条件
喹诺酮类药物色谱图
A为275nm紫外检测谱图、 B为FLD检测谱图
方法线性结果
方法回收率结果
本方法利用在线固相萃取技术建立了快速测定牛奶中5种喹诺酮类残留量的测定方法，进行了系统的方法学验证，重现性、线性关系和回收率优异；利用涡流色谱技术特点，有效去除大分子基质成分干扰，多次进样耐用性和重复性好。
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