毛细管电泳技术在引物质控方向的应用

毛细管电泳技术可应用于离子、化合物、蛋白、核酸、糖类以及细胞和病毒等物质的分离和分析，具有高效、快速、成本低、应用模式开放等显著优势。先多用于环境、食品和工业中的离子分析；药物成分分析和核酸蛋白分子产物检测等等。基于毛细管电泳技术研发的仪器很多，在核酸和蛋白检测方面，毛细管电泳技术正在逐渐替代传统平板凝胶电泳技术。

毛细管电泳与传统的平板凝胶电泳相比具有高分辨率、高速度、高自动化的优势。Qsep 系列毛细管电泳仪独特，就是基于毛细管电泳技术，巧妙的将电泳胶和染料预先混合，制作成成品检测耗材，结合激光诱导荧光检测器，可快速方便的进行核酸蛋白样本检测。可检测的样本非常广泛，例如：Oligo 引物的质量控制、PCR 产物检测、总 RNA 和 DNA 完整性质控、蛋白质-DNA 相互作用测定以及核酸适配体的筛选。

就引物质控来说，引物合成公司化学合成引物后通过 HPLC 仪器回收目的片段后进行冻干，后续还需要进行引物纯度检测。因为引物的主带和杂带分子量时间可能仅相差 1-2 和碱基，所以实验室一般采用 PAGE 方法进行纯度质控，整个质检过程比较繁琐复杂，先配置加有 7M 尿素的 16% 的聚丙.烯酰胺凝胶，取 0.2-0.5OD 的引物用尿素饱和液溶解后变性 95℃ 2 min 进行 600V 电压电泳，2-3 h 后，在紫外灯下检测带型，主带附近无杂带说明纯度高，条带不单一就要根据实际杂带亮度来判断是否需要重新合成。PAGE 电泳的整个过程耗时较长，且无法对主带和杂带进行定量分析，更多靠经验判断样本合格与否。有条件的单位可以采用毛细管电泳-质谱联用（CE-MS）技术来质检 Oligo 引物，不过质谱仪价位较高，用于引物质控会提高引物合成的成本，现有单位利用 Qsep 系列毛细管电泳仪进行 Oligo 纯度质控，分辨率灵敏度会显著高于 PAGE 电泳，仪器价位合适，又可同质谱仪一样给出杂带占比，量化的质控数据更具准确性和直观性（见图 1，图 2 所示）：



图 1 毛细管电泳引物质控结果



图 2 毛细管电泳引物质控结果