DIA定量蛋白质组学质谱检测分析技术服务

蛋白质组（Proteome）概念由澳大利亚科学家在1994年首次提出，指基因组表达的所有相应蛋白质，即细胞、组织或机体全部蛋白质的存在及其活动形式。利用蛋白质组学可以揭示生命活动的基本规律，同时也为临床诊断、药物筛选、新药开发和个性医疗等诸多应用领域提供理论依据。

目前，蛋白质组学的研究主要涉及定量及定性分析，定量分析包括标记定量和非标记定量。

标记定量：基于同位素标记的蛋白质定量技术TMT (Tandem Mass Tag) 技术和 iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation)技术是目前差异蛋白质定量分析方法中通量最高、系统误差最小的分析方法之一，可以同时比较2-11组样品的差异蛋白质表达。TMT/iTRAQ是一种间接定量技术，不同同位素标签对各个样品的多肽氨基基团进行特异性标记后，等量混合经串联质谱分析，得到的肽段谱图中各个样品的同位素标签作为差异基准进行定量计算。具体实验流程如下：

非标记定量：非标记定量技术是测定两种或多种生物样本间蛋白质相对含量的方法，该技术基于母离子离子流峰面积算法核心，包括肽段检测，将多组LC-MS数据间相同的肽段进行匹配 ，选择差异肽段。高分辨质谱使得我们可以在MS1上提取肽段信号，从而把定量从定性过程中分离出来。和标记定量技术不同，每个生物样本要分别在一次非标记实验中测定。提取的肽段信号随后按各自的m/z坐标和保留时间映射到几个或多个LC-MS检测中。高分辨质谱对这个过程有极大的帮助，可以提高不同实验间交叉匹配肽段信号的确定性。在只有单个样品的时候该技术即对样品的蛋白组成进行定性分析。具体实验流程如下：

DIA技术：传统的蛋白质组学采用数据依赖采集DDA策略。DIA技术融合了传统蛋白质组学“鸟枪法 ”(shotgun)和质谱绝对定量“金标准”选择反应监测/多反应监测（SRM/MRM）技术的优势和特点。在DIA分析中，指定质荷比（m/z）窗口内的所有肽段都经过碎裂；分析重复，直至质谱仪覆盖整个m/z范围。这实现了准确的肽段定量，而不限于分析预先定义的肽段。DIA技术具有全景式扫描、数据可回溯等优势。DIA质谱技术被Nature Methods杂志评为2015年最值得关注的技术，被称为“Next Generation Proteomics”（新一代蛋白质组学技术）。具体实验流程如下：

蛋白质靶向定量技术：PRM（平行反应监视，parallel reaction monitoring）是一种基于高分辨、高精度质谱的技术 ，能够对目标蛋白质、目标肽段进行选择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。其优势在于省去了验证抗体有效性的繁琐步骤，同时能够实现几十种以上不同蛋白质的同时靶向验证。PRM包括初步筛选采用的无标肽的目标蛋白相对定量、标肽外标法绝对定量、重标肽内标法绝对定量。根据实验目的、需要验证的蛋白数量和样品数量可灵活选择不同的验证方式。具体实验流程如下：

定量蛋白质组学的方法很多，每种方法都有各自的优缺点，如下，实验中选择何种方法进行实验要根据自己的实验目的去进行匹配选择，以期得到最理想的实验结果。