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膜体系酵母文库构建服务

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参考报价: 面议 型号: 膜体系酵母文库构建服务
品牌: 威斯腾 产地: 重庆
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膜体系酵母文库构建服务

酵母双杂交(Yeast two hybrid)技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用,被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域,已成为分子生物学研究领域的重要实验手段。经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于还可发现与已知蛋白相互作用的未知蛋白。


传统的酵母双杂交系统仅限于核蛋白的互作分析,不能进行膜蛋白的研究。DUALmembrane 系统(DUALmembrane system)是基于分离的泛素(split-ubiquitin)介导的膜蛋白酵母双杂交系统,它提供了不同于常规酵母双杂交系统的蛋白体内分析方法,使得分析膜蛋白间的互作成为现实。其主要特点是可以进行膜蛋白-膜蛋白、膜蛋白-可溶性蛋白间的互作研究。它既可以用于表达文库的筛选,也可以应用于两个已知蛋白(其中一个属于膜蛋白)间互作关系的验证。


DUAL membrane系统

在酵母细胞中,泛素可分为两部分表达,即其N端部分(NubI)和C端部分(Cub),后者融合有能启动核内报告基因表达的LexA蛋白。NubI和Cub-LexA在细胞中组成可分离的泛素蛋白([NubI:Cub]-reporter)体系。


DUAL membrane系统技术特点

任何一种膜蛋白都可以作为诱饵

在细胞膜上原位检测蛋白-蛋白间的相互作用而无需核定位信号

使用分离的泛素结构域(NubG/Cub)使得相互作用蛋白质之间的空间位阻最小化

蛋白间的互作信号依赖泛素特异性结合蛋白(UBPs)剪切人工转录因子(LexA)启动,而不是靠转录,因此可以检测蛋白自身的转录激活或抑制序列



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