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小鼠心肌细胞培养

参考报价: 面议 型号: 小鼠心肌细胞培养
品牌: 威斯腾 产地: 重庆
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小鼠心肌细胞培养


原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型,被广泛应用于心血管研究之中,我中心拥有专业的细胞培养技术平台,为客户提供心肌培养技术服务。

实验步骤

小鼠心肌细胞培养过程:

 1. 把两个5ml注射器分别插入DMEM和胰酶中,分别向两个圆皿中加入5ml的DMEM培养液。用一把大镊子从鼠盆里取出一只生后2~3天的SD大鼠,放入0.1%新洁尔灭浸泡一下后拿出放在泡沫板上,用针头把鼠固定(位置摆正),用另一把大镊子取***酒棉球擦皮肤,再用酒精棉球脱***,取一把小剪子及小镊子开皮,充分撕拉开,再用酒精棉球消毒,后换另一把小剪子和镊子在剑突处正中线稍偏左开胸取心。

2. 取出的心放在刚才准备的一个装有DMEM的圆皿中再取下一只。重复以上过程。(鼠全部杀死后,把取鼠镊及泡沫板、新洁尔灭缸等拿出台面。消毒、清洁,铺纱布、换手套。

3.用第三副剪子和镊子把圆皿中的心脏周边的血凝及纤维组织剔除掉,放在另一个预先装好DMEM的圆皿中。抽取5ml的胰酶,然后将其中少许放入50ml的小烧杯中,大部分倒入三角烧瓶中。用第四副剪子将烧杯中的心脏剪成1mm3的碎块,倒入三角烧瓶中(可用剪刀刮入),再用剩余胰酶刷净烧杯。

4.把温度计和三角烧杯放入250ml烧瓶中,(事先调好水量,多会没过三角烧杯,少温度会不均匀)。打开磁力搅拌器电源,调温度(使-缓慢加到34~35℃)和转速(转速不可过快,否则会打碎细胞,基本上标志为平行)。一定要注意***。

5.温度达到34℃时开始计时,第一次为10分钟,以后可为8分钟,事情况而定。在此期间,在试管架上摆上5、6个离心管,标上1、1,2、2。其中在1号两管事先加入DMEM液各2毫升。

6.10分钟后,把三角烧瓶取下,磁力搅拌器关上,用一个吸管轻轻吹打(使消化下来的细胞彻底从组织团快上掉下来),这个吸管(1)用后固定放在一个离心管中,以后每次消化后取下都用其吹打几下,第一次上清弃去,然后向两个1号管分别倒入2ml上清(尽量不要把组织倒出,也不要剩液太多,以免消化下的细胞重复消化造成损伤),用另一个吸管(2)混匀配平两个管(即两个管水平高度相同),轻轻吹打,以免损坏细胞。

7.接着把这两个离心管放入离心机中,调10分钟,800或1000转,垫小锁,打开关。
8.同时向三角烧瓶中加入5ml胰酶,继续消化8分钟,注意控制温度。此时向两个2号管中分别加入2mlDMEM液。

9.取下三角烧瓶,仍用1号吸管吹打,后静置片刻向两个2号管分别倒入2毫升的上清,取出两个离心后的1号管,把上清液沿细胞贴壁一方慢慢倒掉,后向其中一管加入4ml的DMEM液,用2号吸管取少量液体加入另一个离心管中,把管底的沉淀细胞洗下来,把液体全部移入其中一管,三个管(1个1号管,两个2号管)配平,放入离心管中,离心十分钟。同时仍加5ml的胰酶,放入三角烧瓶中,继续消化(注意控制温度,达34℃时计时)。

10.消化到4次左右,吹打均匀后,吸一滴滴在载玻片上,拿到镜下观察消化情况,决定消化次数。

11.离心2次的吸管,放在试管架上,待离心过程全部完事后,把各管上清液倒掉,在各管加上3ml(不用精确,大致这样)DMEM液,记住共加入多少DMEM液的量,换吸管(3号)把各管底细胞块吸下吹打均匀后,移入50ml烧杯中,然后用注射器抽取余量的DMEM加入烧杯中,加入小牛血清及抗生素,换吸管(4号)吹打均匀。

12.取出24孔培养板,一个人吹打,另一个人用加样器加药。封盖时过火,盖上盖,放在CO2孵箱。24小时后观察是否贴壁。(24孔板,每孔最多加2ml,一般加液时每孔加1~1.5ml)


威斯腾实验服务流程


 

威斯腾生物服务项目

分子生物学检测蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型

SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型


高血压模型
病毒包装实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化
肺炎大鼠模型


肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
BioPlex悬浮芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
生长因子芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
炎症因子芯片软骨细胞培养体内血栓模型
血管生成因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
凋亡因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
趋化因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片
基因编辑动物

电生理相关服务动物整体实验服务

膜片钳实验
细胞生物学检测高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验
条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验
全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验

病理检测CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光

Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研设计指导&文章评估/润色
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠论文翻译润色服务
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)
临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测药物筛选服务项目药效学评价
旷场实验高通量自动药物筛选平台抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测细胞高内涵药物筛选平台心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测蛋白质组学靶标研发平台泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳分子药理研究平台内分泌系统药物药效学评价

生物膜片钳药物筛选平台抗炎免疫药物药效学评价

常规药物体外筛选



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