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江苏齐氏生物科技有限公司
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| 参考报价： | 面议 | 型号： | 免疫共沉淀实验技术（ IP ） |
| 品牌： | 威斯腾 | 产地： | 重庆 |
| 关注度： | 63 | 信息完整度： |  |
| 样本： | 典型用户： | 暂无 |
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免疫共沉淀实验技术（ IP ）
IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“proreinA"特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的proreinA预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。
实验仪器：
高速组织捣碎机：SWISS KINEMATIC Ltd. Co（型号：PT1600E）
电泳仪：北京六一仪器厂（型号：DYY-8C）
电泳槽：北京六一仪器厂（型号：DYCZ-24D）
转印槽：北京六一仪器厂（型号：DYCZ-40D）
低温高速离心机：湖南湘仪公司（型号：H2050R）
超低温冰箱：美国FORMA公司（型号：702）
分光光度计：上海分析仪器总厂（型号：721）
脱色摇床：上海琪特分析仪器有限公司（型号：STS-2）
主要试剂：
HRP标记山羊抗小鼠二抗：北京中山（货号：ZB-2305）
蛋白质预染分子量marker：Fermentas
A蛋白-sepharose珠：Pharmacia Biotech公司产品
NC膜：Millipore公司（型号：0.45um）
化学发光底物底物：PIERCE公司
电泳类生化试剂均为美国amresco公司产品
其他生化试剂为国药集团上海化学试剂公司产品
总蛋白测定试剂盒：南京建成生物工程研究所
操作流程
1、样品准备
1）取细胞加入500μl上样Buffer(无溴酚蓝)和50ul 10mg/ml PMSF，混匀，超声波破碎细胞
2）4℃，12000rpm离心10min
3）取上清夜，-70℃冻存24hr
5）4℃ 12000rpm再次离心10min，取上清分装，一份用于定蛋白，另一份加入溴酚蓝(0.1%(W/V))后于100℃加热4min，后于-20℃保存待用。
2、定蛋白及计算电泳上样量
根据总蛋白测定试剂盒说明书操作测定样本中的总蛋白含量，电泳上样量定为40ug
3、免疫沉淀
1）准备A蛋白-Sepharose珠：用PBS 洗两遍珠子，然后用PBS配制成50%浓度，建议减掉枪尖部分，避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠
2）准备A蛋白-Sepharose珠.一抗复合物：按每50 μl A蛋白-Sepharose珠中加入10ul 一抗，4℃孵育1h，8000rpm离心5 min，PBS洗涤3次，加50ulPBS
3）取100 μg总蛋白，加入50ul A蛋白-Sepharose珠.一抗复合物，4℃轻摇2h，PBS洗涤3次，之后加入50ul1×SDS凝胶上样缓冲液，100℃变性3 min，以游离抗原、抗体、珠子，8000 rpm室温离心5 min，蛋白上清储于-20℃备用。
4、电泳
1）安装好电泳装置
2）根据不同的指标配制相应浓度的分离胶，灌胶约3/5体积，液封(<10%用0.1%SDS,>10%用异丙醇)
3）30min后，待凝后倾去封液
4）配5%的浓缩胶，灌胶至距平板顶部2mm处，插入梳子, 30min后，待凝后拔出梳子，用去离子水清洗加样孔，用滤纸吸干
5）上样：各样品取50ug上样，marker取10μl上样(上样前需按说明书进行预处理)
6）缓慢加入内、外槽缓冲液，接通电源，90v电泳至指示剂进入分离胶后，调电压至150V继续电泳
7）当指示剂距平板底端1cm处时停止电泳
5、 转膜及检测
1）准备2个Φ12cm的平面皿，一个装去离子水浸泡NC膜20min，另一装转移缓冲液浸泡海绵和滤纸20min
2）取下胶，切除浓缩胶部分后，将分离胶浸入转移缓冲液中约5min
3）按顺序安装好转膜装置（黑色板-海绵-三层滤纸-凝胶-***纤维膜-三层滤纸-海绵-红色板）
4）完全排除气泡， 4℃，100mA转膜2hr。
5）倾去转膜缓冲液，拆除转膜装置，将***纤维膜放入丽春红中摇床染色15min，用去离子水清洗至能看到条带，后用铅笔标出marker位置，再用去离子水震荡以去除浮色。在右上角剪去一角以辨上下左右
6）将膜转移至另一容器中，用5%脱脂奶粉封闭, 4℃过夜
7）将膜转移至尽可能小的容器中并加入稀释好的一抗
8）37℃摇床孵育约2hr
9）PBST洗涤4次，每次5min
10）将膜转移至尽可能小的容器中并加入稀释好的二抗，37℃摇床孵育约30min
11）PBST洗涤4次，每次5min
12）将膜转移至尽可能小的容器中并加入预先配制好的化学发光底物（A液与B液等体积混和），室温孵育5min后
13）取出NC膜，去尽残液，包好，放入X-光片夹中显影
14）扫描及分析
6、 结果：
用Quantity One 4.3.1(Bio-rad)软件对照片进行分析(注意：Trace表示 Band光密度分布曲线下面积)
威斯腾实验服务流程
威斯腾生物服务项目
| 分子生物学检测 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA（酶联免疫吸附法）技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SILAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒包装 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 生长因子芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| 炎症因子芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趋化因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 基因编辑动物 | |
| 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 | |
| 膜片钳实验 | ||
| 细胞生物学检测 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理检测 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠来源样本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片（限人和小鼠来源样本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研设计指导&文章评估/润色 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 论文翻译润色服务 |
| 特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等） | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 旷场实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 分子药理研究平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 生物膜片钳药物筛选平台 | 抗炎免疫药物药效学评价 | |
| 常规药物体外筛选 |
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