平板克隆形成

平板克隆形成

细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。

3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。

4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。

克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100%   

平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

平板克隆形成项目介绍：

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，称为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力，各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变，通过计数克隆形成率可对单个细胞的增殖潜力做定量分析，了解细胞的增殖能力和独立生存能力。软琼脂培养或平板克隆是长用的方法。

平板克隆形成实验流程：

调整细胞状态→制备单细胞悬液→按不同的细胞浓度梯度把细胞均匀接种于培养平板→培养10-14天→观察克隆情况，Giemsa染色后计算克隆形成率

平板克隆结果提供：

实验结果图、数据和实验报告

科研实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析

2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq

3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM

4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR

5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA

6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选

7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR

8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建

9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途