400-6699-117转1000
您好,欢迎您查看分析测试百科网,请问有什么帮助您的?
分析测试百科网 认证会员,请放心拨打!
参考报价: | 4500 - 20000 RMB(人民币) | 型号: | microRNA整套技术服务(靶基因功能验证服务,报告基因载体,过表达载体,稳转细胞株等等) |
品牌: | 英拜生物 | 产地: | 上海 |
关注度: | 10 | 信息完整度: | |
样本: | 典型用户: | 暂无 |
400-6699-117转1000
microRNA靶基因验证实验
当前,microRNA对靶基因的功能研究十分热门。利用荧光素酶报告基因检测实验寻找或验证microRNA对靶点作用性是不可或缺的实验技术。英拜生物可为您提供microRNA报告基因载体构建服务,并可进一步为您提供荧光素酶报告基因检测实验服务。您只需要提供目的microRNA靶位点序列,本公司专业技术服务人员就可替您完成载体构建,为您节省大量的时间和精力。
下图为microRNA-reporter载体表达框架示意图,具有多克隆位点,方便插入目的靶点序列。psiCHECK-2载体用于终点法的细胞裂解物检测,包含萤火虫荧光素酶基因,使海肾荧光素酶的表达水平归一化,令该系统更可靠、重现性更好。使用psiCHECK-2载体时,无须通过共转染进行归一化。
英拜生物microRNA报告基因实验流程:
microRNA靶点的预测
利用Targetscan,miRanda,PicTar软件得到目的microRNA的预测靶点序列(客户提供)。
获得microRNA靶点序列
根据提供的靶序列,合成两条互补的单链DNA模板。或者,设计引物PCR扩增目的microRNA靶基因3’UTR序列。
microRNA靶序列克隆
将合成的两条单链退火成双链(具有粘性末端),或将PCR产物双酶切,后连入经过同样双酶切的miR-reporter载体中,连接产物转化大肠杆菌DH5α。
阳性克隆鉴定。
挑选转化的菌落,PCR筛选含有插入片段的阳性克隆,测序验证克隆的序列和目的microRNA靶序列一致。
细胞转染准备
将含目的microRNA靶基因的报告基因载体、内参质粒和microRNA mimics或microRNA negative control共转染293T或Hela细胞。
荧光素酶检测
共转染细胞24-72h后,进行双荧光素酶检测,确定目的microRNA的靶基因。
突变实验
构建miR-reporter载体(含突变靶位点的荧光素酶报告基因载体)与内参质粒、microRNA mimics或microRNA negative control共转染293T或Hela细胞。共转染细胞24-72h后,进行双荧光素酶检测,进一步验确定目的microRNA的靶基因。
整理分析数据,得出结论。
提供有microRNA靶序列的报告质粒,以及内参和对照质粒各一份。甘油保存菌株各一支。附mir-reporter载体的说明书,以及实验报告,包括载体构建过程,鉴定记录,测序报告,细胞转染,荧光检测。
注:
microRNA mimics与microRNA negative control由客户提供或由本公司代购(Dharmacon公司),也选用Pre-miR 与Pre-miR negative control(Ambion)或构建microRNA过表达载体及对照载体(本公司可以构建)。
MicroRNA功能学实验
细胞增殖试验
细胞凋亡试验
细胞周期试验
细胞侵袭试验
细胞迁移试验
服务流程:
构建过表达microRNA载体以及对照载体或客户提供人工合成寡核苷酸→转染细胞系→qRT-PCR检测目的MicroRNA前体的表达情况→分析目的MicroRNA与细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、细胞侵袭、细胞迁移之间的调控关系→出具书面报告,qRT-PCR分析的原始数据
客户提供:
MicroRNA前体(Ambion公司)或mimic 与寡核苷酸(即对照前体或control mimic)及细胞系。
公司提供:
MicroRNA表达载体的质粒、质粒测序图、qRT-PCR分析的原始数据、结果分析的书面报告。
miRNA表达检测
定量检测组织或细胞样本中的miRNA是功能研究的第一步,有助于人们进一步了解 miRNA与疾病发生及发展的关系,以便为疾病的早期诊断提供新的思路。本公司主要通过microRNA芯片、microRNA-Seq、microRNA PCR 芯片、实时定量PCR、原位杂交等多种方法检测miRNA的表达情况。为您提供最优质的、全方位的技术服务。
1、microRNA芯片检测服务 http:
2、 microRNA PCR芯片检测服务 http:
3、microRNA-Seq检测服务http:
4、microRNA定量PCR http:
miRNA芯片,microRNA-Seq数据深度发掘分析
a) 芯片,测序数据聚类分析
b) microRNA靶基因预测“TargetScanS”, “miRanda (miRBase)”,“miRGen”等数据库
预测差异microRNA的所有靶基因。
c) 靶基因GO分析
根据Gene Ontology数据库对靶基因进行功能显著分析,从而筛选显著性功能的靶基因。
d) 靶基因pathway分析
根据KEGG数据库对靶基因进行Pathway分类,并进行显著性分析从而得到显著性的Pathway分类。
e) 构建的MicroRNA与基因的调控网络
通过构建MicroRNA与基因的调控网络,可以从中找出hub基因及hub microRNA.
f) microRNA 、靶基因、转录因子调控网络
microRNA也会受到转录因子调控造成表达差异,通过系统研究转录因子与基因间的调控关系,可以为寻找重要转录因子及重要基因提供线索。
g) microRNA启动子分析及甲基化位点分析
当microRNA研究日趋火热,越来越多的研究者开始关注microRNA本身甲基化变化。MicroRNA基因的甲基化变化也是造成microRNA表达差异的重要原因。
microRNA整套技术服务(靶基因功能验证服务,报告基因载体)信息由上海英拜生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于microRNA整套技术服务(靶基因功能验证服务,报告基因载体)报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。
注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途