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TALEN基因敲除/敲入鼠

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制作原理

 

 

      TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease) 技术是基于对DNA识别的TALEN臂和人工改造的核酸内切酶的切割域(Fok)的结合对细胞基因组进行修饰而实现的。TALENDNA识别域是由一些非常保守的重复氨基酸序列模块组成,每个模块由34个氨基酸组成,其中第1213位的氨基酸种类为可变的(RVDs),且决定了该模块识别靶向位点的特异性。通过DNA识别域结合到靶位点上,以及FokI的切割域形成二聚体后,可特异性对目标基因DNA实现切断。在非同源末端连接修复过程中,DNA双链断开后会由于碱基的随机增减造成目标基因功能缺失。 该技术目前已成功应用于植物、细胞、酵母、斑马鱼及大、小鼠等各类模式动物的研究领域。

 

 

服务流程和周期

 

 

TALEN技术流程图

      TALEN由四部分组成:N端序列,RVDC端序列,FokI。利用Type II 限制性内切酶可以将RVDs模块分别生成不同的粘性末端,同时又不留有酶切位点, 通过一系列的相应酶切连接反应实现RVDsTALEN骨架的无缝连接。
      TALEN
系统利用FokI的内切酶活性打断目标基因。FokI形成二聚体发挥活性,在TALEN结合臂的引导下,发挥特异性内切酶活性,在两个靶位点之间剪切DNA,形成DSBDouble- Strand Breaks,诱发DNA损伤修复机制。细胞通过NHEJNon- homologous End Joining)修复DNA,在此修饰过程中导致删除或插入了一定数目(非3的倍数)的碱基,造成移码,形成对目标基因特异性KO的突变体。

 

TALEN技术特点

1、可以应用于大小鼠,无动物品系限制;

2、修饰效率可达90%以上;

3、实验周期短、价格低。

 

服务类型

1、全身性基因敲除

2、点突变

3、小片段基因敲入

 

建系原则与流程

1TALEN技术获得的基因敲除鼠,由于是在大鼠或者小鼠的鼠原核受精卵期进行的修饰,获得的F0鼠一般也是杂合子,并且每只FO鼠由于移码突变情况可能不一样,所以每只F0鼠也需要作为一个独立的谱系进行传代; 

2、原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子鼠,F0代杂合子鼠与野生型鼠进行交配,获得测序鉴定阳性的F1代杂合子鼠(可能有多种突变类型的F1);

3、选择来自同一只F0代鼠,突变类型一致的F1代鼠,达到性成熟后与进行同胞交配,可获得F2代鼠。对交配获得的F2代鼠进行PCR及测序鉴定,理论上, F2代鼠中25%为相同突变型的纯合子鼠,有50%为只有一条染色体突变的杂合子鼠,有25%为野生型鼠。

 

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公司简介

 

赛业生物科技集团是全球领先的多元化跨国生物科技实体,2006年成立于美国,中国区总部设立在广州,并在苏州设有分公司,北京、上海、武汉、重庆等地均有办事处。目前员工人数达400余名,总规模超22000平方米,业务经营范围涵盖模式动物、细胞生物学、分子生物学、生物信息学等生命科学领域的多个分支学科。

作为全球领先的基因敲除和转基因模式动物商业技术平台,赛业生物拥有10000平米实验动物中心,动物种群规模超过10万只,每年可构建基因敲除及转基因鼠模型10000例以上,学术引用累计超过700篇并多次发表在Nature、Nat Cell Biol、Genome Res等顶尖期刊。通过ISO9001:2008与AAALAC国际认证,确保向广大科研学者提供的技术服务严格符合国际标准。

  

 

专家团队介绍 

 

欧阳应斌 博士(赛业生物技术副总裁、高级科学家)

        欧阳应斌博士,国际知名的分子生物学和模式动物专家,1993年于军事医学科学院博士毕业后,二十多年来一直身居美国致力于分子生物学和基因工程模式 动物研究,先后就任于Indiana大学医学院、Oklahoma医学研究基金会和美国首屈一指的模式动物商业机构Taconic生物科技公司。
        目前任职于跨国生物技术实体Cyagen Biosciences(赛业生物科技),担任技术副总裁和高级科学家,由其率领的科学家团队数年来成功开发了上千种转基因、基因敲除/敲入小鼠及大鼠实 验动物及疾病模型。在PNAS、JBC等高水平杂志发表论文10余篇,由其提供的技术服务被Nature等国际顶尖杂志直接引用达数百次之多。

 

 

俞晓峰 博士(赛业生物技术总监、高级科学家) 
        俞晓峰博士,国际知名模式动物和细胞生物学专家,1995年军事医学科学院博士毕业,2000年起任耶鲁大学医学院研究员。2003至2009年期间 任职于美国 iTL 基因打靶公司,作为资深科学家和项目经理,负责基因工程小鼠模型研发方案与策略的设计,项目的管理,技术人员的指导与培训等工作。2007年起负责开发了 人源化 p53 基因不同点突变的肿瘤小鼠模型库项目。2009年起任纽约大学
医学院研究员。

        2010至2013年期间担任美国 ASC 生物技术公司研发部总监,模型生物服务部总监,以及斯坦福生物公司总裁等职务,目前任职于跨国生物技术实体Cyagen Biosciences(赛业生物科技),担任技术总监和高级科学家。俞博士在遗传工程小鼠领域有超过 15 年的开发和管理经验,在干细胞相关领域和哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就,其研究成果多次发表在Nature Immunology.、Hum Mol Genet.、Mol Cell Biol.等高水平杂志上。 

 

TALEN基因敲除/敲入鼠信息由赛业(广州)生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于TALEN基因敲除/敲入鼠报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。

注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途

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