AbSeq 抗体测序

北京安必奇生物科技有限公司的抗体测序平台，采用DASS（Database Assisted Shotgun Sequencing）技术，结合现有技术的优势，可对抗体进行分析。它是基于质谱技术打造的抗体测序平台。除了能够对抗体序列在10个工作日内完成例行测序外，这项技术还适用于其它亚型和不同形式的抗体，如：IgM，荧光偶联抗体，固定化抗体，不同物种的抗体等。

北京安必奇生物科技有限公司作为抗体定制服务供应商，专注于单克隆抗体的生产和工程领域。利用多种抗体文库技术（包括噬菌体展示、细菌展示和酵母展示）以及杂交瘤技术，实现对人、猴、兔、羊、鸡、狗、骆驼、羊驼、牛、小鼠、大鼠、豚鼠及鲨鱼的单克隆抗体生产。此外，在抗体大规模制备服务方面，能制备利用细菌生产的单链抗体、双功能抗体、串联scFv、miniantibody和Fab，以及哺乳动物细胞表达minibody、嵌合抗体和IgG。

一、平台特点

北京安必奇生物科技有限公司采用DASS（Database Assisted Shotgun Sequencing ) 技术，通过使用质谱仪和数据处理算法，生成大量序列信息，进而运用计算程序对MS/MS光谱从头测序，利用其内部数据挖掘工具使得我们从MS/MS光谱数据中提取目标抗体序列信息。

• 运用DASS技术对V、J、C片段测序

目前世界上的一些数据库（如NCBI）虽然包含抗体V、J、C片段序列，但是在抗体成熟的过程中，一个B细胞中的抗体基因要经历体细胞突变的过程才会产生高亲和力的成熟抗体。我司的计算方法容错率高，并能匹配相应物种的突变肽段。使得肽段都会被检测到，而且每一个氨基酸位点都会生成20-27条MS/MS光谱，因此，对于难测序的高脯氨酸（proline）和精氨酸（arginine）肽段也可实现测量，而且不需要再进行额外的Edman测序来辅助测序。

• CDR3区测序

抗体轻链的 CDR3 区多由胚系基因编码，而重链的 CDR3 区则由 D 基因编码。D基因大部分区域由于受到核酸酶及末端转移酶等重组酶的作用而发生基因重排，导致抗体重链 CDR 区在数据库中无法进行同源比对。一般来说，一个成熟的抗体只有 1-4 个氨基酸是由 D 基因编码的，而其他序列都是基因重组排的结果，而只能对其进行 de novo 测序。

通过多种酶切来产生多种互相重叠的肽段，以测得较长的未知氨基酸序列。高质量的质谱数据域高效率的数据挖掘算法的结合，使我们对抗体CDR3 区域的解读更为有力，最终可以测得数据库中无同源序列的，20kDa的蛋白。

• 等重氨基酸测序

与其他基于MS测序方法不同的是，此技术平台可以分辨大多数等重氨基酸复合物。
如：W 可从GE、AD、SV中区别出来（MS）；
R  可从GV中区别出来（MS）；
Q  可从GA、K中区别出来（Fragment spectra 和 MS）；
N  可从GG中区别出来。

二、平台优势

• 全序列覆盖：

传统的抗体测序技术难以做到全序列覆盖，传统的技术几乎都得借助部分数据库中的信息。即，实测一部分，预测一部分。而DASS平台可以达成全序列覆盖，对于抗体的可变区更是每个位点至少覆盖4次。

• 适用于超变区的数据处理算法

DASS采用质谱软件PEAKS Mass Spectrometry Software，与2008年Nature杂志发表的de novo单抗鸟枪法测序（Bandeira et al, 2008）中所用的算法相比，DASS能够对抗体的超变区进行鉴定。

• 区分分子量接近的氨基酸

我们采用Orbitrap Elite测序仪，其可以突破传统测序技术带来的分辨率低的限制，可以同时匹配3800个肽段。传统技术很难区分分子量接近的氨基酸（如谷氨酰胺和赖氨酸分子量差异仅为0.03D），而DASS则可以克服这些由传统技术带来的短板。DASS已经超过MALDI-TOF时间飞行质谱的精度，正成为从事抗体研究和抗体药物研发的科学家们的新宠。

• 可对荧光标记单抗、IgMs、及其他非传统抗体进行测序

DASS通常不受小基团（如FITC、Biotin、Alexa）的影响，虽然较大的蛋白基团会给测序带来难度，但若提供较高浓度的蛋白仍可成功测序，因为测序质量与提供的样本量相关。

• 对IgM的测序方法与 IgG 类似，只是需要的样本量更多。

• DASS适用于小鼠源和兔源抗体，此外目前已经有大于50个来源于仓鼠和羊的抗体也被成功测序。

• 化学或者生物偶联的抗体也可被成功测序，只是需要的样品量更大。

• 许多杂交瘤细胞产生2条轻链，其中一条为无义链，也可对这些抗体混合物进行测序。

三、服务优势

• 可定制抗体片段测序

我们可根据客户需求，可选择只测定抗体的轻链、重链或者可变区。另外，偶联的抗体和IgM等少见抗体亚型的测序也都可定制。

• 时间花费低

技术革新带来的是时间成本的降低，DASS平台的时间花费是传统测序方法的一半以下，在收到样品后，3-10个工作日内即可完成全序列测定。

• 样品量要求低

仅需要提供25-100μg纯化的抗体。

• 测序种类多样

可对荧光标记单抗、IgMs、及其他非传统抗体进行测序。

四、我们承诺

• 覆盖 VJC 和 VDJC 区域。

• 每个氨基酸位点至少覆盖4个不同的肽段。

• 对轻链的测序误差范围在+/- 1.2 Da，对重链的误差范围在+/- 1.8 Da。

  
  

五、样品要求

普通 IgG 和偶联修饰基团（FITC，Alexa，Biotin）的 IgG：需要 25-100 μg 样品，如能提供 200 μg样品效果会更佳。
含有 BSA 的单抗，羊源或者兔源，IgM，固定化的单抗，以及偶联大修饰基团（PE，APC）的单抗：需要经过特殊样本处理，一般 500 μg 样品可满足测序。

免疫球蛋白A（IgA）抗体测序服务

免疫球蛋白E（IgE）抗体测序服务

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途