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DNA的提取原理及提取技术

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DNA的提取原理及提取技术
天然DNA的来源:
1 染色体DNA
  原核生物和真核生物均含有染色体DNA,它是分离目的基因和基因表达调控因子的主要材料。
2 病毒和噬菌体DNA 
  主要用于构建基因克隆载体,也可作为分离目的基因和基因表达调控因子的材料。
质粒DNA 
3多微生物(大肠杆菌、农杆菌和蓝细菌)都含有质粒DNA,主要用于构建基因克隆载体,也可作为分离目的基因和基因表达调控因子的材料。
4 线粒体和叶绿体DNA
这是真核生物特有的染色体外遗传物质,分别含有与呼吸作用和光和作用相关的基因。主要用于分离目的基因。

植物细胞的化学成分主要有:
1 水、糖类、蛋白质、脂肪以及核酸是生物体所需的基本成分;
2 氨基酸是合成蛋白质的基本原料;
3 果胶、纤维素、半纤维素是植物细胞壁的组成成分;
4 淀粉是光合作用的产物;
5 金属离子主要用来调节细胞的渗透平衡等,比如钾和钠,镁和***是叶绿素的成分。

植物总DNA提取原则
保证DNA结构的完整性  
排除有机溶剂和金属离子的污染
蛋白质、多糖、酚类等降低到zei低程度
排除其他核酸分子的污染

植物DNA提取的基本原理
DNA特点:
   DNA是极性化合物,溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。
   在酸性溶液中,DNA易水解,在中性或弱碱性溶液中较稳定。
   DNP在盐溶液中的溶解度随着盐浓度的增加而增加。
植物DNA提取的基本原理
DNA提取基本步骤:
1 细胞裂解和DNA的溶解
   主要任务:破碎细胞并对DNA实施保护。
   采取措施:
    ⑴利用液氮研磨,使酶失活;
    ⑵快速加入缓冲液并迅速混匀,对细胞溶浆中DNA进行保护。
EDTA—螯合DNA酶的辅助因子Mg2+和Ca2+,使DNA酶活性降低;
  SDS—使蛋白质变性并降解蛋白质,也可降低DNA酶的活性;
  抗氧化剂—降低酚类氧化对DNA的干扰;
   PVP—与多酚形成复杂的聚合体,与多糖结合,有效去除多糖;
植物DNA提取的基本原理


2  与核酸结合的蛋白质及RNA等杂质的去除;
   主要利用DNA与蛋白质、多糖等在生化性质上的差别,通过加入离子变性剂,去污剂使蛋白质或多糖变性,核蛋白解聚。
   CTAB
   SDS
除蛋白质
氯仿/异戊醇抽提(氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离;异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡)。
使用变性剂变性 (SDS、异硫***酸胍等)
高盐洗涤(当溶液中的中性盐的浓度大于1mol/L 时,蛋白质会沉淀析出 .)
蛋白酶处理

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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途

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