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技术简介 :
高通量测序平台利用染色质免疫互沉淀的方法,使用抗体中和特定的蛋白,富集特异***联的DNA-蛋白质复合体,然后将寡核苷酸接头与特异性蛋白结合的DNA延伸拼接,从而可进行海量平行测序。ChIP-Seq以精确敏感大量且成本廉价的方法实现了目标蛋白在全基因组范围内的全部结合位点的定位。
染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)也称结合为点分析法,是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具,通常用于转录因子结合位点或组蛋白特异性修饰位点的研究。将ChIP与地二代测序技术相结合的ChIP-Seq技术,能够高效的在全基因组范围内检测与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段。
生物信息分析:
1.检测可能的样品污染
2.ChIP-Seq序列与参考序列比对
3.统计样品Uniquely mapped reads在基因上、基因间区的分布情况及覆盖深度
4. Peak calling:统计样品Peak信息(峰检测及计数、平均峰长度、峰长中位数)
5. Peak全基因组定位
6. 靶基因功能注释及GO分析
7. 靶基因pathway mapping
8. 靶基因相关网络构建
9. 与Peak相关的motif分析
送样要求:
样品 | 要求 |
DNA | ≥10ng |
浓度 | ≥1ng/ul |
纯度 | OD 260/280 =1.8~2.0 ;无蛋白及RNA 污染 |
技术优势:
ChIP-on-chip | ChIP-Seq | |
分辨率 | 30-100bp | 1bp |
覆盖范围 | 受芯片容量限制,只能选择性的扫描特定区域,无法覆盖全基因组 | 只要测定的序列能够定位到基因组上,就能获得全部基因组信息 |
缺陷 | 探针和非特异性区域杂交 | 测序数据会有一些 GC 含量偏向 |
性价比 | 智能研究在基因组上广泛存在的目的位点(Broad binding ) | 可以扫描全基因组;可以研究在基因组上存在的须有目的位点( sharp binding ) |
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