血清中蛋白药物多反应监测定量的胰蛋白酶消化流程的优化

引言 

使用蛋白酶解多肽替代蛋白药物进行质谱定量分析是明智的选择。对 生物体液中（例如血清、血浆和尿液）蛋白药物定量遇到的挑战之一 就是如何为每个待分析蛋白找到适合的内标物质。同位素标记的蛋白 标准品已经成功用于单克隆抗体的定量1-3 ，但是，这些标准品价格昂 贵并且其生产会耗费大量的时间。 

由于蛋白质的定量是在肽水平上进行的，另一种替代方法是使用较便 宜的同位素标记的肽作为内标4-7 。出于对胰消化效率的考虑，2004年 引入了13 C 15 N -同位素标记的可分解肽（加长肽）5 。 

无论IS的性质如何，两种定量方法均依赖于使用特异性的酶（例如胰蛋 白酶、Lys C）对蛋白样品进行消化。蛋白质的消化已经是一个公认的 分析流程中差异的主要来源4-9 ，这种流程必须进行精心优化。此外， 当使用整体消化法时，即将肽内标用于定量，就会产生另外一个问题, 即在生物基质存在的情况下，治疗性蛋白质和同位素标记的肽内标的 酶解效率是否相同。 

本应用对胰蛋白酶消化方法进行了优化，以便开发出成功的多反应监 测（MRM）分析方法。一般而言，胰蛋白酶消化优化的目的是为了得 到更高的分析灵敏度、更短的样品制备时间和更高的分析再现性。 

这里，我们使用了一种单克隆抗体药物，用于研究胰蛋白酶相对于整 体消化定量法的消化效率。对这两个消化参数——蛋白质-胰蛋白酶比 和消化时间进行了优化。此外，还对整个样品制备方法的再现性进行 了评估。