人血浆中缓激肽的SPE LC-MS/MS定量检测方法开发

简介 

缓激肽是一种含有9种氨基酸的生理和药理活性肽，由蛋白质的激肽基 团衍生而来（图1）。激肽是可以促使血管舒张、血管通透性增强、一 氧化氮释放和花生四烯酸流动的效应因子。它是血压、肾功能和心脏 功能的重要调节因子，还参与炎症反应1 。缓激肽可引起血管扩张，从 而导致血压降低。因此，对这种激素肽的变化进行高灵敏度、高选择 性和高准确度地定量，并将其作为疾病进展或药物治疗的评估指标， 将会极为有利。尽管以往都是通过配体结合试验（LBAs）对生物制剂 进行定量分析，但在过去几年中利用LC-MS/MS分析大分子已成为一种 趋势。这在某种程度上是因为LBAs产生显著的交叉反应问题并且缺乏 标准化。LC-MS/MS具有多种优势，例如开发时间更短、准确度和精度更 高、可重复进样，并且容易区分相似度很高的类似物、代谢物或内源 性干扰物。常见的肽通常难以通过LC-MS/MS进行分析，这是因为其不易 离子化以及不易产生理想的碎片离子而导致MS灵敏度较低，从而使得 LC和样品制备方法开发非常困难。由于缓激肽在血浆中的浓度低至pg/ mL水平且代谢速度快，在采血和样品制备过程中还可通过蛋白水解人 为生成，因此对其进行准确定量相当困难。 

本研究采用了专门设计的血液收集技术以防止体外缓激肽的形成，并 且利用混合型固相萃取（SPE）和高效实心核颗粒色谱柱，最大限度降 低并消除基质干扰的同时提高定量分析的灵敏度。