非酒精性脂肪肝来势汹汹 是甘油三酯的锅吗？

在没有过量饮酒的健康患者的肝脏中，三酰甘油酯（甘油三酯，TGs）和二酰甘油酯（甘油二酯，DAGs）的异常积聚被称为非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）。它包括从简单的脂肪变性（SS）到非酒精性脂肪性肝炎（NASH）以及更严重的肝硬化的一系列疾病。非酒精性脂肪性肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因，普通成人NAFLD患病率10%～30%，其中10%～20%为NASH，后者10年内肝硬化发生率高达25%。

TGs（甘油三酯）是NAFLD中肝脏的主要脂质成分，但是迄今为止，NAFLD肝脏中单个脂质的空间分布特征尚不清楚。最近，加拿大麦吉尔大学与蒙特利尔大学最近进行了一项合作研究，旨在通过基质辅助激光解吸电离飞行时间成像质谱（MALDI-IMS）绘制正常人肝样本和患有NAFLD及肝硬化的肝脏中甘油三酯（TGs）的分布图，研究不同脂肪酸链长度及饱和程度的甘油三酯（TG）与NAFLD组织病理学特征的关系。

由于缺乏足够敏感和/或选择性的MALDI-IMS样品制备方法，研究人员无法从组织切片中检测出广泛的TGs，其分辨率足以区分其组织病理学特征（即单个脂质滴）与组织，所以很少有人对人体样本或特定靶向TGs进行研究。最近报道的掺钠金辅助MALDI-IMS的使用弥补了组织切片中TGs分析的这一空白。这项技术大大提高了组织中TGs检测的灵敏度，并具有较高的IMS空间分辨率（<15μm点对点）。首先通过沉积碳酸盐缓冲液和醋酸钠溶液对组织切片进行处理，然后在盐层上覆盖一层薄薄的金，以实现TGs解吸所需的紫外吸收；这增加了对TGs分子的特异性，与传统的MALDI方法相比，质谱信号更少。

MALDI质谱成像小贴士

融智生物于2017年推出QuanTOF质谱成像系统，该系统集合了新一代宽谱定量飞行时间质谱平台QuanTOF，拥有强大的5,000Hz长寿命半导体激光器，以及自主开发的数据采集软件。2018年7月，融智生物宣布实现可达500像素/秒的成像速率，提升MALDI-TOF MS成像速率达10倍以上，普通样本成像只需几十分钟，使得质谱成像实现了“立等可取”。经过进一步的研发，目前QuanTOF质谱成像系统已经实现高达1000像素/秒的成像速率，5-10微米的高空间分辨率，且仍然保持高灵敏度。这使得质谱成像真正可用于临床病理分析、术中分析等领域。

简单脂肪变性和肝硬化肝脏样本的掺钠金辅助MALDI-IMS测量。富含饱和甘油三酯的区域被单不饱和甘油三酯包围。A.简单脂肪变性的肝样本显示肝细胞膨胀区域富含饱和甘油三酯，被单不饱和甘油三酯包围。B.在肝细胞膨胀和肝硬化的样本中具有同样的分布。比例尺200μm

研究人员利用掺钠金辅助激光解吸电离成像质谱（MALDI-IMS）监测系统样品制备，在10μm横向分辨率下分析20份人体肝样品（5份正常肝脏，5份单纯脂肪变性样品，5份脂肪性肝炎样品，5份肝硬化样品）。共鉴定出24种脂质，主要是中性脂质（22种TGs和2种磷脂）。在脂肪变性程度较低的样本中，TGs在中央区周围聚集。在所有样本中，侧链饱和程度和侧链长度不同的TGs均呈现出差异分布。此外，含有大量脂滴的肝细胞高度富含完全饱和的TGs。在患有脂肪性肝炎和肝硬化的样品中，在肝细胞膨胀的区域中也观察到这种富集。

虽然研究人员的发现来自于一个小的队列，但它提供了对大囊泡脂肪变性的新理解；富含饱和TGs的大脂滴可能反映了在过度肥胖期间新生脂肪生成的增加和对饱和脂肪酸的保护机制。这些肝细胞可能是水解时的代谢负担，也可能是凋亡和炎症发生的区域。当然，为了证实这些结果，还需要进一步分析更大队列中的TGs分布以及研究大泡脂肪变性及饱和TGs在NASH发展中的作用。