牛津杯法测细菌代谢产物抗菌活性的操作步骤

1. 首先将事先配好的指示菌培养基煮融，稍冷却后放到恒温箱中，60℃恒温2-3小时。（因为恒温时间较长，所以第一件事情就是先把培养基放到恒温箱恒温，在恒温的这段时间做别的事情可以节约很多时间。）

2. 把培养基放到恒温箱后开超净工作台的紫外线杀菌20分钟。杀菌的前把经过高压灭菌的牛津杯、镊子、Ep管、培养皿、移液枪等需要用到的工具放进工作台，紫外线可以将表面的菌杀死。

3. 杀菌结束后将微生物发酵液管从摇床培养箱拿到超净工作台，用移液枪将试管中的液体吸到Ep管中，然后放到离心管离心。在离心的时候配置甘油培养基，用来保存菌种。

4. 离心结束后将Ep管和甘油培养基拿到工作台，将Ep管的上清液吸到一个经过杀菌的管中放置备用。吸干净上清液后往Ep管中加入1ml甘油培养基用来保藏菌种（沉淀物），将菌种放到-20℃的冰箱保存。

5. 牛津杯测微生物代谢产物一般要将上清液稀释成5个浓度梯度，即1mg/ml  0.1mg/ml  0.01mg/ml  0.001mg/ml  0.0001mg/ml。这时候指示菌培养基应该恒温到60℃了。

6. 将指示菌培养基拿到工作台上，加入所需的指示菌，摇匀，然后倒平板。倒平板后要马上用镊子将牛津杯竖直插入到培养基上面，静置。带培养基凝固后拔出牛津杯。

7. 用移液枪吸取200微升刚刚稀释好的上清液到牛津杯的孔中，注意不要让上清液占到周围也不要让上清液溢出牛津杯表面。加液前要先将每个孔编号，例如ABCDE，因为加液后不可以将培养皿倒过来。全部上清液弄好之后将培养皿放到恒温箱中培养12小时，观察抑菌情况。如果上清液有抑菌活性，牛津杯周围会形成一个透明圈，用直尺量直径并记录。

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